二、血清總三碘甲腺原氨酸(TT3)測定
(一)原理
循環血液中的T3，一部分來自甲狀腺，大部分(70％一90％)來自T4的脫碘轉化。絕大部分T3與血漿TBG結合，僅0.4％處于游離狀態，具有生物活性。T3RIA可直接測定血清主的總三碘甲腺原氨酸(TT3)，即游離T3(FT3)與結合狀態T3的總和。大多數情況下，TT3與FT3相平行，能用以反映甲狀腺功能，甲亢時TT3升高，甲低時TT3降低。TT3的測定同TT4樣受TBG的影響。
(二)性能
1．了解各類甲狀腺疾病的甲狀腺功能，對早期發現甲亢更有重要意義，是診斷T3甲亢的特異性指標；???
2．用于非甲狀腺疾病中低T3綜合癥的診斷。
3．可用于對甲亢或甲低病人治療后的隨訪觀察，判斷其預后及治療效果。在藥物治療時，可作為增減藥物或停藥的一項重要參考指標。
(三)操作方法
按試劑盒說明書操作。 現以兩種常用的TT3RIA試劑盒為例說明。
第一種：固相TT3試劑盒，即包被法。
1。試劑盒內容物的準備
(1)總T3抗體——包被試管：100支T3抗體包被的聚丙烯試管，包裝在拉鎖袋中。冷存，防潮。打開后要仔細地重新封好。在2—8℃可穩定至袋上所標明的失效期。顏色：粉紅色。
(2)[125I]總T3：一瓶碘標記T3溶液，內含甲狀腺素結合蛋白的阻斷劑。每瓶105毫升。冷存開封后，在2—8℃可穩定至少30天，或至瓶上所標明的失效期。顏色：紫色。
(3)總T3標準品：一套六瓶分別標明A至F的標準品溶液，該溶液以處理過的人血清為基質。備用。零標準品有2.0毫升溶液，其余標準品B至F瓶各有1．0毫升。冷存。開蓋后在2—8℃可穩定至少30天。冷凍可延長標準品的使用期。如果有必要，可分瓶以避免反復凍融。???
標準品的濃度分別為0、20、50、100、200和600ng／d1，相當于0、0．31、0．77、1．54、3．07和9．22nmol／L。以合適比例混合所給出的標準品溶液，可得到其它濃度的標準品。
2．分析步驟
(1)空白管：成對標號4支空白(未包被)12X 75mm聚丙烯試管：T（總計數)和NSB(非特異結合)。
注：因為在該檢測中，非特異結合很低，所以可舍去NSB管，而對結果的準確度沒有影響。
包被管：成對標號12支總T3抗體——包被試管：A（最大結合)、B至F。成對標號其它總T3抗體——包被試管用以質控和病人樣品的檢測。
| 標準品 | μg/dl | nmol/L |
|---|---|---|
| A(MB) | 0 | 0 |
| B | 20 | 0.31 |
| C | 50 | 0.77 |
| D | 100 | 1.54 |
| E | 200 | 3.07 |
| F | 600 | 9.22 |
(2)向A管和NSB管中，加入100μ1零標準品A。向其它標號試管中寸加入100μl對應的標準品、質控和病人樣品。切記：直接加到試管的底部。
注；高值病人樣品應使用零標準品稀釋。
(3)向所有試管中，加入1.0毫升[125I]T3(紫色)。輕輕地振蕩幾下。
注：加樣過程不得超過10分鐘。取出總T待計數(見第6 步)。
(4)在37℃溫育120分鐘。
注：在水溶中進行。
(5)完全傾去溶液。
注：除去所有可見的液殊將大幅度提高精確度。使用泡沫傾倒架，除去所有試管中的內容物，使試管空干2—3分鐘(試管倒置不會損失抗體結合的物質)。然后，在吸水紙上叩擊試管，除去所有的液珠。
(6)計數1分鐘。
3．結果計算
為了從logit-log標準曲線上計算T3濃度，首先計算每對試管的1分鐘平均凈計數。
凈計數＝平均CPM一平均NSB CPM
然后計算每對試管相對于最大結合(MB)的百分結合率。A管的百分結合率為100％。
凈計數
凈計數=－－－－－－－－×100%
凈MB計數
可舍去對非特異結合的校正，使計算簡化，當百分結合率直接由平衡CPM計算時，最后得到的樣品濃度與實際結果相同。
使用logit-log坐標紙。以百分結合率為縱坐標，T3濃度為橫坐標，對B到F標準品的檢測結果作圖。標準曲線近似為連結5點的直線，未知樣品的T3濃度通過內插法從這條直線上估算出。
第二種：PEG法TT3試劑盒。
1.試劑內容及配制
(1)[125I]T3，紅色，3—4dCi／瓶，體積22ml，含有巴比妥緩沖劑、AMS和BSA。直接用于實驗。
(2)抗T3血清，含有巴比妥緩沖劑和BSA。使用時加入22ml蒸餾水溶解后為蘭色液體，放置10分鐘后使用。
(3) T3標準品：配制在去T3血清中。使用時分別加500μI蒸餾水，放置10分鐘并輕輕旋轉瓶子，使其充分溶解后方可用于實驗。T3含量分另為0、0．5、1．0、2。0、4．0、8．0ng／m1。
(4)PEG：含巴比妥緩沖劑，直接用于實驗。
2．分析步驟
加樣及測定程序見表2及其說明：
表2 TT3RIA操作順序表（單位ul）
| 試管組 | T3標準 | 待測血樣 | 125I-T3 | 抗T3血清 | 37℃溫育1小時 | PEG |
|---|---|---|---|---|---|---|
| T | － | - | 200 | - | - | |
| 標準 | 50 | - | 200 | 200 | 500 | |
| 樣品 | - | 50 | 200 | 200 | 500 |
（1)試管編號；1—2號管為T管，用于測量總計數率，3一14號管分別加入T3標準溶(濃度為0、0．5、1·0、2．0、4．0、8.0ng／ml各50μ1(標準做雙管)。15號管后加入待測血清50μ1。
(2)各管均加)k1251Ts溶液200~1，混合均勻。
(3)各管(除T管外)均加入抗T，血清溶液200~1，混合均勻，在37℃溫育1小時。
(4)各管(除T管外)均加入PEG溶液500~1，充分混勻后，在離心機上以3500轉／分轉速離心15分鐘。
(5)立即棄去上清液(除T管外)。
(6)測定T管及各管沉淀部分的放射性計數率。
3、結果計算
參照PEG法TT4試劑盒。
4．操作注意事項
參照PEG法TT4試劑盒。
(四)參考值
隨所用的試劑盒，實驗室條件及被測對象而異，青壯年處于平衡狀態，50歲以上逐漸下降，70歲以上明顯下降。故必須建立不同年齡組T3參數值。男女性別對TT3影響不大。