關于淘汰血清非蛋白氮測定
淘汰血液非蛋白氮測定的原因及可替代的項目和方法
淘 汰 的 理 由
非蛋白氮是血液中蛋白質以外的低分子含氮化合物中氮的總稱，這些化合物包括尿素、肌酐、肌酸、尿酸、氨基酸、氨和谷胱甘肽等。最常用的測定方法是血液無蛋白濾液經強酸消化后，用萘氏試劑反應顯色，產生棕黃色碘化雙汞銨。
淘汰非蛋白氮測定的原因：一、方法操作步驟繁雜，影響因素多，回收率低，準確度和精密度差；二、不能自動化分析；三、正常人血液非蛋白氮中約50％為尿素氮，尿毒癥時尿素氮占80％以上。大多數情況下，非蛋白氮和尿素測定的臨床意義相同，所以尿素測定可以取代非蛋白氮測定。
可替代的項目和方法
一、血清尿素二乙酰一肟測定法 (不除蛋白的直接法，適于手工操作)
(一)原理
在強酸和加熱條件下，二乙酰一肟生成二乙酰。后者與尿素反應生成紅色復合物。加入硫脲和鈣離子可提高反應靈敏度、線性和顯色的穩定性。
(二)試劑
1．酸性試劑
于1升容量瓶中加入蒸餾水100ml，然后加入濃硫酸44ml及85％磷酸66ml，冷卻后加入硫脲50mg及蘋酸鎘(3CdS04．8H2O)2g，溶解后用蒸餾水稀釋至1升，貯棕色瓶中，置冰箱，可保存半年以上。
2．20g/L二乙酰一肟試劑
二乙酰一肟20g，用蒸餾水溶至1升，貯棕色瓶中，置冰箱，可保存半年以上。
３．尿素標準液
10．71mmol／L(相當于氮300mg／L)精確稱取干燥恒重純尿素64．2mg，用蒸餾水溶解后加入苯甲酸100mg，以蒸餾水加至100ml。
(三)操作見表1。
表1? 血清尿素二乙酰一肟法操作步驟(ml)
測定管 | 標準管 | 空白管 | |
血清或血漿 | 0．02 | — | — |
尿素標準液 | — | 0．02 | — |
蒸餾水 | — | — | 0．02 |
酸性試劑 | 5．0 | 5．0 | 5．0 |
二乙酰一肟試劑 | 0．5 | 0．5 | 0．5 |
混均、煮沸10分鐘，流水冷卻。在540nm用1cm光徑比色杯以空白管調零，讀取各管吸光度。
計算： 標本管吸光度
尿素(mmol/L)=-----------------×10.71
標準管吸光度
(四)附注???
1．血清尿素含量超過線性范圍12mmol／L時，應將血清稀釋后測定。
2．尿液標本用蒸餾水稀釋50—200倍后測定。
3．顯色后，隨時間延長有輕度褪色現象，故顯色后應及時比色。
4．本法缺點是干擾因素較多，精密度不夠高，試劑對人體有害和加熱步驟不便于自動分析。???
二、尿素酶—谷氨酸脫氫酶偶聯速率法測定尿素 (適用自動分析)
(一)原理
尿素酶
尿素＋H2O---------→2NH3＋H2O
谷氨酸脫氫酶
NH3＋α-酮戊二酸＋NADH＋H----------------→谷氨酸＋H2O＋NAD+
在340nm測定吸光度。其降低比例與NADH氧化的初速率或尿素濃度成正比。
(二)試劑
以某尿素(氮)測定試劑盒為例：
α-酮戊二酸 7．5mmol／L
NADH 0.32mmol／L
尿素酶(巨豆) 80001Μ／L
谷氨酸脫氫酶(牛) 10001Μ／L
ADP 1.2mmol／L
Tris緩沖液 100mmol／L
保存劑 適量
測定參數
溫度 30℃或37℃
波長 340mm
吸光度范圍 0—2A
比色杯光徑 1．0cm
線性反應時間 1分鐘
延遲時間 30秒
反應體積 1ml
標本體積 0．010ml
計算： 標本△A/分
尿素mmol/L＝---------------×標準濃度
標準△A/分
線性范圍：35mmol／L以內。
參考值：2.3～7.8mmol／L(與年齡、性別和蛋白質攝入量有關)。
(三)附注
1．本法特異性高，快速，干擾少，適用自動化分析。
2．文獻或試劑盒中酶、α-酮戊二酸、ADP、NADH用量配比差異較大，所以在使用試劑盒時，必須通過實驗獲得最適條件。試劑盒中尿素酶和谷氨酸脫氫酶濃度配比十分重要。尿素酶濃度不足時，即使增加谷氨酸脫氫酶濃度，反應速率仍然不會加快。只有當尿素酶適量時，反應速率才隨谷氨酸脫氫酶增加而明顯提高。而α-二酮戊二酸濃度過高則會抑制酶反應。ADP可增強反應速率，但高濃度的ADP時反應速率的增加逐趨下降。
3．尿素測定的尿素酶-波氏顯色法? 尿素被尿素酶水介生成氨，用酚-次氯酸鈉顯色。本法易於常規使用，但反應時間較長。
4．電導法? 尿素被尿素酶作用生成NH4+和C032—離子使導電率增加。本法特異性高，可自動化分析，但需特殊儀器，不便推廣。
（莊一義）
【編者注】
長期以來，臨床上血清(漿)尿素測定習慣以“尿素氮”一詞報告結果，用法定單位可出現兩種計算方法。一種是以尿素的毫摩爾數報告，另一種以尿素經水解后生成的銨(NH4+)中的氮原子的毫摩爾數報告，兩者結果相差一倍。
用尿素氮來表示血清(漿)尿素含量是有歷史根源的。早期用比色法、滴定法或量氣法測定尿素。不少方法最后系測定尿素分子中的氮含量，結果以氮的濃度(mg／dl)表示。這樣也便于與過去常用的非蛋白氮(NPN)測定結果相比較，這一習慣至今仍在沿用。雖然國際單位系統及世界衛生組織建議用尿素的毫摩爾數(mmol／L)報告結果，但在實際工作中的很多場合，人們仍在沿用以氮的濃度(mg／d1)報告結果，以致引起—定程度的混亂。
目前測定血清(漿)尿素的方法可分為兩大類：即直接化學法和酶法。直接化學法亦稱二乙酰一肟法，根據尿素與二乙酰反應縮合生成紅色二嗪類化合物的原理，直接測定尿素而非尿素中的氮。酶法雖然測定經脲酶水解尿素生成的NH4+但實質仍是測定尿素，使用蹈標準工作液亦為尿素。如果用尿素氮報告結果是不合躁的，應以尿素的實際含量報告結果。
建議今后血清(漿)尿素測定統一以尿素一詞，并以其mmol／L濃度報告結果。慣用的尿素氮mg／d1濃度換算成尿素的mmol／L濃度時，應乘以0．357，即：尿素氮mg／d1X 0．357＝尿素mmol／L。
長期以來慣用尿素氮的英文縮寫BUN一詞是由Blood Urea Nitrgen的首個字母組成、實際上目前測定尿素都采用血清或血漿標本，沒有或很少采用全血標本，而且測定物是尿素而不是尿素氮。可見BUN一詞已不切合實際情況，建議廢用。