人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒

 簡介
腎素受體(RR)是腎素和腎素前體的共同受體.當腎素與其受體結合后, 腎素作用于全身循環及局部組織中的血管緊張素,使其變成血管緊張素1,另外腎素受體受刺激后會激活細胞內的信號通道.
公認地對RR的研究對抑制過度活躍的腎素-血管緊縮素-醛固酮系統提供重要的研究方略.
(P)RR是一種分子量為39 kDa的單跨膜受體蛋白.據報道其中的29 kDa的可溶性片段是由于RR的裂解而產生的.因此定量的檢測血液或尿液中的可溶性(P)RR可以作為檢測發病新的輔助工具,作為解釋其病理機制的新途徑.
此ELSIA檢測試劑盒可以定量檢測人血液和尿液中的可溶性腎素(前體)受體。日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 

此試劑盒基于酶免法的夾心原理，利用兩種高特異性抗體，TMB作為顯色劑，顯色的強度與人腎素受體的量成正比
  
125~8000pg/ml
日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 
 
僅用于研究，不能用于診斷
此試劑盒可用于血清，EDTA-血漿，尿液和細胞培養上清液中人腎素受體的定量檢測

1. 預包被板，抗人腎素受體兔IgG，親和純化            96孔

2. 標記抗體濃縮液，

30X，HRP標記抗人腎素受體（93A1B）小鼠IgGFab’   0.4mlx1

1. 標準品，重組人腎素受體                           0.5mlx2

2. EIA緩沖液，1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS        30mlx1

3. 標記抗體稀釋液，1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS   12mlx1

4. 著色劑，TMB底物液                              15mlx1

5. 終止液，1N硫酸                                  12mlx1

6. 洗滌緩沖濃縮液,40X，含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液   50mlx1 

7. 酶標儀

8. 微移液管和槍頭

9. 燒杯

10. 去離子水

11. 冰箱（4℃）

12. 坐標紙

13. 吸水紙

14. 用于稀釋標準品的試管

15. 洗瓶

16. 一次性試驗管
    

17. 洗滌緩沖液制備：先將洗滌濃縮液平衡至室溫，充分混勻，然后吸取50ml濃縮液與1950ml的去離子水混勻，即得。配制的洗滌液應保存于冰箱內，并于2周內用完

18. 標記抗體的制備：用標記抗體稀釋液將標記抗體稀釋30倍，即得。

如：如果只測一條板，8孔，則需要標記抗體800ul（30ul的標記抗體+870ul的標記抗體稀釋液，混勻，使用時每孔加100ul）
此步驟在實驗前完成
剩余的標記抗體濃縮應裝于密封瓶內，保存在4℃

1. 標準品的制備：吸取0.5ml的去離子水至標準品瓶內，充分混勻，得到1600pg/ml的人腎素受體標準品

2. 標準品的稀釋：準備8個試管用于標準品的稀釋，每管加入230ul的EIA緩沖液

每管的濃度如下
1號管                 8000pg/ml
2號管                 4000 pg/ml
3號管                 2000 pg/ml
4號管                 1000 pg/ml
5號管                 500 pg/ml
6號管                 250 pg/ml
7號管                 125 pg/ml
8號管                 0ng/ml（試驗樣品空白）
吸取230ul的標準品于1號管混勻，然后從1號管吸取230ul加入2號管，依次連續稀釋，標準品范圍為8000~125 pg/ml

1. 樣品稀釋：樣品用EIA緩沖液稀釋。如果樣品濃度未知，建議稀釋幾個不同比例的樣品進行檢測，來確定樣品最佳稀釋比例

2. 使用前，所有樣品應平衡至室溫，大約30min，然后充分混勻，確保試劑質量無變化，標準曲線和樣品檢測同時進行
   

   試劑	檢測樣品	標準品	檢測樣品對照孔	試劑對照孔
   檢測樣品100ul	稀釋標準品（1-7管）100ul	EIA緩沖液（第8管）100ul	EIA緩沖液100ul
   蓋板，4℃下孵育過夜
   洗板4次
   酶標抗體	100ul	100ul	100ul	-
   蓋板，4℃下溫育60min
   洗板5次
   顯色劑	100ul	100ul	100ul	100ul
   室溫避光溫育30min
   終止液	100ul	100ul	100ul	100ul
   加終止液后,30min內于酶標儀450nm處讀取OD值

1. 確定試劑空白孔并加入100 μL  EIA緩沖液

2. 各加加100ul試驗樣品空白，樣品和稀釋的標準品至相應的孔內

3. 蓋板，4℃下孵育過夜

4. 洗板，重復4次以上，吸水紙上拍干

5. 每孔加入100ul的標記抗體液，除試劑空白孔外

6. 蓋板，4℃下孵育60min

7. 洗板5次，同步驟四

8. 吸取試驗所需的TMB底物液于一次性試管內，每孔加入100ul的TMB底物液。剩余的TMB底物液不能再放回至原裝瓶內

9. 黑暗處，室溫下孵育30min，溶液變藍

10. 每孔加入100ul的終止液，溶液變藍

11. 擦去微孔板底部的污點或水滴，終止液加入后30min內，在酶標儀450nm處讀數

1.  試驗樣品采集后應立即檢測或是凍存，凍存的樣品避免反復凍融，檢測前應在低溫下先將其完全溶解混勻

2. 試驗樣品用EIA緩沖液稀釋，

3. 試驗樣品和標準品應做雙份檢測

4. 試驗樣品應在中性PH范圍，有機溶劑的污染可能會影響檢測

5. 只能用試劑盒提供的洗滌液洗板，否則會導致試驗失敗

6. 吸水紙上拍干微孔板，不能擦拭

7. TMB底物液應貯存于黑暗處，因其對光敏感，且避免接觸金屬

8. 加入終止液后30min內必須酶標儀讀數 

繪制曲線前，所有的數據都應減去試驗樣品空白值，包括標準品和未知的樣品。以標準品的OD值和濃度在對數-對數坐標紙上繪制標準曲線，從標準曲線上可直接讀取未知樣品的濃度
 
附：采用全自動酶標儀檢測，只需檢測前設置好酶標儀的相關參數，如坐標參數（線性，半對數）和計算方式參數（三次回歸、四參數或雙對數曲線方程），即可直接得到結果
 日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。