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  • 發布時間:2020-10-12 18:32 原文鏈接: 人白血病耐藥細胞株傳代培養及注意事項

    人白血病耐藥細胞株安全性:所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后,在倒置鏡下zui好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。具體步驟如下:

    (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

    (二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。

    1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。

    2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱,之后翻轉培養瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量完全培養基終止消化。

    3. 按6-8ml/瓶補加完全培養基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明,收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。

    注意事項:

    1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

    2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

    3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。

    4、收到細胞后,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。


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