使用前除沉淀劑外所有試劑均應在室溫下平衡。
（1）標明T（總計數）、NSB（非特異性結合）、A（最大結合）及B到G，標明質控及血樣，均作雙管。
（2）向NSB及A管中加入100μl0標準品，向B到G管中加入相應試劑100μl，質控及血樣均加100μl。
（3）向各試管加入100μl ACTH抗血清（除NSB及T管）混勻。
（4）室溫溫育60min。
（5）向各管加入100μl ACTH標記物。
（6）4℃溫育至少16h。
（7）向各管中加入1ml沉淀劑、混勻。
（8）3000×g離心15min。
（9）用泡沫傾倒架，傾倒上清液，保留沉淀以計數。
（10）1min計數。
注：讓試管倒置于吸水紙上10min，輕輕敲擊試管，去掉殘存液滴。