1、降低眼壓：眼內各部組織（如視網膜、葡萄膜、晶體）均有碳酸酐酶存在，并以睫狀體的量最多。青光眼時，睫狀體上皮內碳酸酐酶活性增高，從而生成過多的碳酸氫鈉，使房水內滲透壓升高、房水生成量增加、眼壓升高。乙酰唑胺能抑制睫狀體上皮碳酸酐酶的活性，從而減少房水生成（50%～60%），降低青光眼患者眼壓。還有人認為，乙酰唑胺的降眼壓作用是由于其減少血漿中HCO3-的濃度、增加血漿氯化物的濃度，從而引起代謝性酸中毒，使血堿儲備量下降所致。
2、心源性水腫：乙酰唑胺可用于心源性水腫，但對腎臟性及肝臟性水腫無效。乙酰唑胺能抑制腎小管上皮細胞中的碳酸酐酶，使H+的產生和Na+重吸收減少，Na+、水與重碳酸鹽排出增加，因而產生利尿作用。但乙酰唑胺利尿作用不強（對于伴有水腫的子癇患者則有良好的利尿降壓作用），且長期服用可產生耐藥性，因此目前很少單獨用于利尿。當與汞利尿藥合用時，可彼此糾正引起的酸堿平衡失調。
3、其他：乙酰唑胺還可減少腦脊液的產生和抑制胃酸分泌，其機制可能也與抑制碳酸酐酶的作用有關。乙酰唑胺抗癲癇的作用機制尚不十分清楚。