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  • 發布時間:2024-08-27 15:26 原文鏈接: 關于染色質免疫共沉淀的基本原理介紹

      1、檢測目標基因活性

      在保持組蛋白和DNA聯合的同時,染色質被切成很小的片斷,通過運用對應于一個特定組蛋白標記的生物抗體,將目標片段(組蛋白發生特異標記的片段)沉淀下來。ChIP是利用抗原和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“protein A”特異性地結合到免疫球蛋白的Fc片段的現象合用開發出來的方法(免疫磁珠結合proteinA,proteinA結合抗體Fc段,抗體結合抗原即發生特異標記的組蛋白,這里要注意組蛋白是和DNA結合的,這樣就把目標組蛋白和DNA的復合體沉淀下來了)。再將組蛋白與DNA分離,用獲得的DNA去做PCR分析和序列測定等檢測技術,從而進一步檢測哪些基因的組蛋白發生了修飾。 [5]

      2、檢測已知蛋白的靶基因

      在生理狀態下把細胞內的蛋白質和DNA交聯在一起,超聲波將其打碎為一定長度范圍內的染色質小片段,然后通過所要研究的目的蛋白質特異性抗體沉淀此復合體,特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而明確蛋白與哪些基因相互作用。

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