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  • 發布時間:2022-04-14 16:39 原文鏈接: 關于核小體的檢測技術的介紹

      許多不同的技術已被用于檢測AnuA,除了LE細胞試驗以外,還有染色質包被的串珠乳膠凝集試驗,以及免疫沉淀(用天然組織蛋白重組酸萃取的組織部分和ELISA法都已被使用。早期的研究用“脫氧核苷蛋白”作抗原研制出一種孵育在1M生理鹽水中的染色質中的預備品,但未得到明確鑒定。后期報道已有更好的方法來鑒定該預備品,并能分析凝膠電泳后的蛋白質和DNA的組成。染色質的類型分析以及陰、陽性判斷對于輔助診斷SLE患者而獲取高敏感性和特異性是非常重要的。第一種研究用于以變性的H2A和H2B作為抗原進行DNA再造,由血清結合上組織蛋白的變性區域,即天然染色質非暴露部分;第二種研究用于整條染色質作為抗原,剩余的Scl70蛋白引起抗Scl70,血清在此情況下產生弱陽性;第三種研究用于一個陰、陽性的弱的(低的)判斷(硬皮患者血清呈現弱陽性)。第一代與第二代核小體檢測技術的比較通過對SLE組(96例)、患者對照組(73例)、正常對照組(47例)進行AnuA和抗dsDNA抗體的檢測,采用由德國EUROIMMUN公司生產的試劑盒和美國Coda公司生產的全自動酶標分析儀檢測。結果表明,EUROIMMUN推出的第二代抗核小體抗體ELISA檢測試劑與第一代比較敏感度差異不大,但特異性卻有了明顯提高。早期因核小體抗原純化制備方法存在技術上的問題,純化的核小體抗原常含有H1、Scl70(DNA拓撲異構酶I,一種DNA結合蛋白)、殘留的染色質DNA和其他非組蛋白等蛋白成分,導致多種結締組織病患者血清與核小體抗原交叉反應,尤其是在10%~68%的硬皮病患者中也可檢測出AnuA,使得該抗體作為SLE特異性抗體的臨床應用價值得到了很大的限制;而第二代AnuAELISA試劑在抗原的制備上有了很大的改進,抗原分離純化技術提高,純化的核小體抗原制品只含核小體單體,不含以上提到的DNA和組蛋白等雜質成分,可排除硬皮病患者血清假陽性反應,這樣就使得AnuA對SLE的診斷價值得到了充分的發揮,極大提高了AnuA對SLE的特異性,已開始應用于臨床常規檢測。

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