關于電泳法—SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法的操作介紹

　　(1)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法— 制膠 用30%丙烯酰胺溶液－分離膠緩沖液－20%十二烷基硫酸鈉溶液－10%過硫酸銨溶液（新鮮配制）-四甲基乙二胺-水(5.0∶1.5∶0.08∶0.1∶0.01∶5.3)制成分離膠液，灌入模具內至一定高度（剩余體積留作制備濃縮膠用），用水封頂，聚合完畢，傾去水層。再用30%丙烯酰胺溶液-濃縮膠緩沖液-20%十二烷基硫酸鈉溶液-10%過硫酸銨溶液-四甲基乙二胺-水(0.8∶1.3∶0.025∶0.05∶0.005∶2.4)制成濃縮膠液，灌在分離膠上，插入樣品梳（如為圓盤電泳，用水封頂），待濃縮膠液聚合后，小心除去樣品梳或水。

　　(2)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法— 對照品和供試品溶液的制備 照各藥品項下的規定。

　　(3)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法— 電泳 垂直板電泳：恒壓電泳，初始電壓為80V，進入分離膠時調至150～200V，當溴酚藍遷移膠底處，停止電泳。

　　(4)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法— 用卡尺或用掃描定位法測量溴酚藍指示劑和蛋白遷移距離（如為圓盤電泳還應測量染色前后膠條長度，垂直板電泳膠片厚度低于1mm，染色前后膠片長度基本不變）。計算相相對遷移率:分子量 以R'<[m]>為橫坐標，標準蛋白的分子量對數為縱坐標，進行線性回歸，由標準曲線求得供試品的分子量。；純度 取膠片（條），置薄層掃描儀，以峰面積按歸一化法計算；結果判斷 供試品主成分遷移率應與對照品遷移率一致。