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  • 發布時間:2019-03-29 23:16 原文鏈接: 包涵體沉淀溶解實驗

    試劑、試劑盒

    緩沖液 AN-十二烷基肌氨酸鈉(SKL)考馬斯亮藍(CBB) 染色液脫色液快速蛋白質斑點印跡試驗用試劑

    儀器、耗材

    SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠(10%)分子量標準參照物

    實驗步驟

    材料與設備

    SDS-PAGE 電泳裝置

    聚丙烯酰胺小膠(10%)

    分子量標準參照物

    試劑

    緩沖液 A

    N-十二烷基肌氨酸鈉(SKL)(20% 水溶原液)

    考馬斯亮藍(CBB) 染色液

    脫色液

    快速蛋白質斑點印跡試驗用試劑 (見 P.172)

    (配方,見「試劑的配制」,PP.184~189)

    操作程序

    1) 第 2 次 2%D0C 懸液(見 p.149), 于離心前取 6x50-ul 等分試樣。然后將這些樣品用微型離心機全速離心 1 min, 棄上清。

    2) 各沉淀物中分別加入 100ul 含 0%、0.1%、0.2%、0.3% 和 0.6%SKL 的緩沖液 A。沉淀物劇烈重懸后靜置 10 min, 再用微型離心機離心 lmin,取上清樣品,供快速蛋白質斑點印跡試驗用(見 PP.172-173),觀察沉淀物的多少。

    3) 每份上清作 SDS 凝膠電泳,并與樣品 A、B—起做快速蛋白質斑點印跡試驗。

    4) 作凝膠電泳分析時,于 10% 的 SDS 凝膠上,樣品 A、B、C、D 及 0.1%SKL 上清、0.2%SKL 上清、0.3%SKL 上清、0.4%SKL 上清、0.6%SKL 上清各加樣 20ul, 分子量標準參照物加樣 3ul,120V(20mA) 電泳約 60 min。

    5) 凝膠用 CBB 染色液染色 30 min 后,置脫色液中漂洗、脫色,直至顯現條帶。

    展開


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