臺盼藍 (Trypan Blue)
染色法是組織和細胞培養中最常用的死細胞鑒定染色方法之一。正常的活細胞,胞膜結構完整,能夠排斥臺盼藍,細胞不被染色;而死細胞的胞膜不完整,通透性增加,可使臺盼藍滲入將細胞染成藍色。因此,借助臺盼藍染色可以簡單、快速地區分活細胞和死細胞。
想當年小編還是初入實驗室的小白時,以為臺盼藍染色的效果應該是這樣的(左),然而現實卻是那樣的(右)
不是說好的“金標準”嗎?染成這樣哪里還能準?
如果你是Nexcelom的粉絲,從往期文章中應該了解過臺盼藍染色法的局限性,以及當前最受認可的AO/PI熒光染核法的原理和優越性(參考小知識)。
細胞的死亡狀態
在細胞實驗中,我們一般會遇到兩種類型的細胞死亡:一種是自然狀態下的死亡,即細胞自身的老化或營養耗盡造成的死亡,通常會經歷比較長的過程;另一種是誘導的瞬間死亡,比如藥物處理、熱水浴等,通常會在短時間內發生作用。兩種不同狀態的細胞死亡會讓臺盼藍染色出現不同效果嗎?
自然死亡
為了模擬細胞在自然狀態下的死亡,研究者將Jurkat細胞放置在常溫下,并在0,6,12,24,48,72,96和168小時后取出部分細胞和0.4%臺盼藍1:1混合染色。
從圖片中我們可以看到,從0-12小時,死細胞大多被染成較深的藍色;而從24小時起,我們會觀察到一些淺藍色呈彌散狀態的物體(紅色箭頭)。對于這樣的未知物,研究者們起了一個可愛的名字 – “氣球” [1]。這些“氣球“到底是什么呢?是細胞變的還是某種雜質?