實驗概要
本文以鼻疽為例介紹了固相補體結合試驗(solid phase complementfixation test，SPCFT)的原理和操作流程。
實驗原理
原理與直接補體結合反應的原理相同，即以是否溶血為標志，間接測定補體是否被特異的抗原抗體復合物所消耗的一種血清學反應。如果不溶血稱為固相補體結合試驗陽性；發生溶血，則稱為固相補體結合試驗陰性。由于該試驗是在瓊脂糖凝膠反應盤中進行的，因而使反應用要素和反應結果固相化，故名。
主要試劑
1. 1%瓊脂糖凝膠瓊脂糖1g，加入生理鹽水100ml中，煮沸融化備用。
2. 1%溶血素。
3. 壓積綿羊紅細胞用生理鹽水以3 000 r/min洗3次，每次3min。
4. 凍干補體及鼻疽抗原。
5. 被檢血清及標準陽性、陰性鼻疽血清。
實驗步驟
1. 溶血系統瓊脂糖凝膠反應盤的制備及打孔：取1%溶血素溶液32ml與壓積綿羊紅細胞0.8ml混合，置37℃水浴槽中感作30min，即為致敏紅細胞液。吸取致敏紅細液33ml，加入融解后冷至51～55℃的1%瓊脂糖凝膠100ml中，混勻，傾注入特制的塑料反應盤內，每盤約25ml。待其凝固后，用直徑6mm打孔器打孔，每盤打孔兩列，每列4孔，孔距不得小于8mm。
2. 溶菌系統的處理、加入及感作：將1∶2稀釋的被檢血清與1∶50的鼻疽抗原及1∶2倍的補體等量混合，放37℃恒溫箱中感作1h后，用微量吸管吸取以上三者的等量混合物25μl，加入制備好的致敏紅細胞瓊脂糖凝膠反應盤的孔中，然后將加過溶菌系統的反應盤置37℃恒溫箱中感作25～3h后，觀察結果。注意每次試驗應作標準陽性血清及陰性血清、抗原及補體的對照，每個對照孔諸要素的混合、感作及滴加量，均與試驗孔相同。
注意事項
1. 一塊25×75cm的致敏紅細胞反應盤一般打孔兩行，每行不超過4孔，孔距不低于8mm，否則由于打孔過多，孔距太近，容易產生溶血排斥現象，嚴重的可影響試驗結果。
2. 在制備致敏紅細胞反應盤時，還必須注意厚度均一，應于呈水平的臺面上澆制為宜，否則反應盤兩端的瓊脂糖厚度不同，勢必造成薄者溶血環大，厚者溶血環小。
3. 特異性及敏感性，在固相補反中，除與類鼻疽血清發生明顯的交叉反應外，與被試的其它多種血清均不發生交叉反應。這種方法對鼻疽馬的檢出率比直接補體結合反應高，且操作簡單。依本方法的原理還可用于馬傳貧抗體及流行性乙型腦炎病毒抗原的檢測。