培養基的配制:
1、稱量和熬煮
按培養基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中,加水1000ml,在加熱器上加熱至沸騰,維持20-30min,用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾,濾渣棄取。
2、加熱溶解
把濾液放入鍋中,加入葡萄糖20g,瓊脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉網上,小火加熱,并用玻棒不斷攪拌,以防瓊脂糊底或溢出,待瓊脂完全溶解后,再補充水分至所需量。
3、分裝
按實訓要求,將配制的培養基分裝入試管或500ml三角瓶內。分裝時可用三角漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上造成污染。
4、加棉塞
培養基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等),以阻止外界微生物進入培養基內造成污染,并保證有良好的通氣性能。
5、包扎
加塞后,將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道線繩或橡皮筋扎好,用記號筆注明培養基名稱、組別、配制日期。
培養基配制注意事項:
1、培養基經滅菌后,必須放在37C溫箱培養24h,無菌生長者方可使用。
2、PDA培養基一般不需要調pH。對于要調節pH的培養基,一般用pH試紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏堿時,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調節。
3、調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部過酸或過堿破壞培養基成分。
4、培養基在使用時也可以做成不含瓊脂的液體培養基,用于菌類的震蕩培養。
5、培養基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量為0.2g/L培養基,主要是為了抑制細菌的生長,減少干擾性。
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