實時熒光定量PCR技術及在我國衛生應急中的應用

實時熒光定量PCR技術（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR，如果用于RNA檢測，這被稱為逆轉錄實時PCR即Real-time RT-PCR）是實時PCR法，它是指對DNA或經過反轉入（RT-PCR）的RNA通過聚合酶鏈式反應并實時監測DNA的放大過程，在擴增的指數增長期就測量擴增產物，因為擴增指數增長期測量值與特異DNA（RNA）起始量存在相關性，從而實現定量檢測。

Real Time PCR的基本目標是精確測量和鑒別非常微量的特異性核酸，從而可通過監測CT值而實現對原始目標基因的含量定量。目前被普遍使用的多種常規PCR方法如各種凝膠電泳PCR法，終點熒光定量法或PCR-ELISA法叫做終點PCR法。實時熒光定量PCR法最大的優點是克服了終點PCR法進入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差，實現DNA/RNA的精確定量。

普通PCR技術發明于1983年，而實時熒光定量PCR技術發明于上世紀九十年代并于1996年生產出了世界上第一臺實時熒光定量PCR儀，實時熒光定量PCR技術得以實現的技術要素主要有熒光定量PCR試劑盒和實時熒光定量PCR儀，我國熒光定量PCR試劑盒研發實力強大，生產廠家較多，臨床診斷的品種如HBV/HCV及禽流感診斷試劑盒性能優良、供應充足，基本實現國產化。在豬流感病毒RNA核酸序列明確的情況下，利用現有的試劑研發平臺，人感染豬流感實時熒光定量PCR診斷試劑盒很快就會面世。實時熒光定量PCR儀由于技術含量高，只有少數幾家中國企業有能力生產如西安天隆科技有限公司生產的TL-988系列儀器不但取得了發明ZL、國家科學技術獎、國家重點新產品證書、醫療器械注冊證，而且被國家發改委確立為國家高技術產業化示范工程2008年生物醫學工程專項，產品性能達到國際先進水平，在乳品檢測行業市場占有率比進口儀器還高[1-3]。實時熒光定量PCR儀應用廣泛，1999年開始，西方發達國家嘗試將PCR應用于臨床傳染病診斷、食品安全檢測以及血液篩查，目前已相當普及。2008年12月13日中國衛生部下發《衛生應急隊伍裝備參考目錄》（衛辦應急發[2008]207號），其中要求縣級以上衛生應急隊伍建設中必須配備PCR儀和實時熒光定量PCR儀作為傳染病控制類裝備。