一、. 實驗試劑：
1. 無水乙醇
2. 10/1000 間二硝基苯溶液
3. 5mol/L的KOH
4. 70％去醛乙醇
5. 雄酮標準溶液（1ml=0.2mg）
二、實驗操作方法：
l. 取潔凈容器加人10ml濃HCL作為防腐劑。然后收集24h尿液準確記錄總尿量。
2. 將尿液混勻吸取5ml于三角燒杯中，加冰酯酸5ml加熱沸騰，回流水解10min，流水冷卻。
3. 此經水解的尿液放入分液漏斗中，加入乙醚(AR)約20ml振搖2-3min,靜置分層以后,棄去下層尿液.
4. 加lmol/L的NaOH 10ml輕輕顛倒20次，棄去NaOH層，再加蒸餾水15ml輕輕顛倒20次，棄去NaOH層，再加蒸餾水15mL輕輕顛倒20次，棄去水層。
5. 將洗過的乙醚提出液放入一只有20ml刻度的大試管中，用少量乙醚洗漏斗壁，此洗滌乙醚放入大試管中，然后加乙醚補充至20ml刻度混勻。
6. 取2支大試管每管各取上乙醚提出液5ml一管作測定，另一管作測定空白，置37℃干燥箱中使乙醚揮發干。
7. 取上述制備的標準管一支，內含雄酮0.02mg。
以上各管按表進行操作：
混勻在530nm波長處以70%去醛乙醇溶液調零分別讀取各管吸光度。
三、 計算：
（測定管吸光度-測定空白管吸光度-試管空白吸光度）/（標準管吸光度-試管空白吸光度）×0.02×24h尿總量(ml)/[(5/20)×5]= 17-酮類固醇mg/24h尿 注意事項1. 所用的乙醇需要精制。2. 市售間二硝基苯需要純化。3. 所用乙醇必須分析純。4. 當尿液用乙醚振搖混提出后如發現乙醚與尿液分層不明顯，可加入飽和NaCL溶液數ml繼續振搖之。5. 水解時，采用硝酸較為溫和且水解較安全。6. 所需試管吸管需干燥無水，否則影響結果。7. 本法所顯色不夠穩定，顏色化合物對光敏感故顯色及比色時均應暗處進行，比色步驟須于加完試劑后6-12min完成，大批標本宜分批顯色。 | 