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  • 發布時間:2019-11-03 15:55 原文鏈接: 常見的T載體及連接方法

    T載體 是TA克隆載體的簡稱,就是利用載體的T末端和PCR產物的A末段連接而將目的基因克隆到載體中的方法。

    目前市場上常見的T載體 ,根據連接方法可以分成兩種:

    方法1、以T4連接酶進行連接的方法,這種方法的載體 有P公司、T公司,

    可以說這兩家公司將這兩種方法發揮到了很高的水平,轉化子比較多,陽性率

    也不錯,唯一的不足就是連接的時間長。因為連接時間越長效率越高,要達到較好的連接效率,一般要過夜連接。國內很多公司模仿這種方法制作T載體 ,不僅連接時間也很長,而且做不到P公司、T公司的陽性率和穩定性。

    方法2、以拓撲異構酶(TOPO)進行連接的方法,最早采用這種連接方法的是I公司,并且申請了ZL,這種方法的優勢是快速連接,在5-15分鐘就可以將目的基因克隆到載體 中,陽性率比較高,這種方法國內也有人模仿,照理說,這種載體能迅速的替代P公司、T公司,但是為什么P公司、T公司的載體銷售還是主流呢?那就要說一下拓撲異構酶這種連接方法的缺點:

    1、長片段的連接效率很低,大于1.5K的片段用這種方法連接效率很低;

    2、轉化子少,雖然陽性率高,但是轉化子少;

    3、穩定性比較差,拓撲異構酶對溫度很敏感,運輸的溫度和連接的溫度都會影響,用水浴鍋控制連接溫度因為溫度誤差比較大就很難連接,必須用PCR儀;

    這兩種方法各有優缺點,有沒有一種T載體能夠兼備兩種方法的優點,而克服兩種方法的缺點呢?一直致力于生物技術原創技術開發的百泰克公司新近推出的PUM-T載體兼具兩種方法的優點,不僅提高了連接效率和陽性率,而且連接時間僅僅需要10-15分鐘,即使難以連接的長片段DNA(1.5K以上)的連接效率也遠遠超過TOPO克隆的方法,極大的方便了生物科研工作者的研究,節約了時間提高了效率!工欲善其事,必先利其器!磨刀不誤砍柴工!我們期待更多的致力于技術原創的生物公司能夠帶來更多方便的產品,更多國內的生物技術公司能夠逐漸占領生物技術的高地,在給我們帶來方便的同時,也降低了整個行業的科研成本,讓我們科研工作者有限的資金能發揮更大作用,做更多的研究,為生物技術的發展做出更多的貢獻!


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