一、原理
葡萄球菌a蛋白（SPA）具有與多種哺乳動物IgG分子fc段結合的能力，并與不同IgG亞類的結合力有所差別。改變pH及離子強度可洗脫結合于SPA-sepHarose cl-4b 柱上的IgG或不同的IgG亞類，可直接純化血清或小鼠腹水中的IgG抗體。
二、試劑器材
1、spa-sepharose cl-4b （pharmacia-sigma）
2、磷酸緩沖液0.1mol/l pH8.6＋0.02% NaN3
3、枸櫞酸緩沖液
0.1mol/l pH5.5 0.1mol/l pH4.0
0.1mol/l pH3.0 分別+0.02% NaN3
4、1mol/l pH9.0 tris-HCl溶液
5、再生緩沖液
（1）0.1mol/l tris含0.5mol/l NaCl調整pH至8.6+0.02% NaN3；
（2）0.1mol/l 醋酸鈉含0.5mol/l NaCl調整pH至2.2+0.02%NaN3。
三、操作步驟
用0.1mol/l pH8.6磷酸緩沖液浸泡SPAF-sepharose cl-4b凝膠，15min。按1g干膠200ml上述緩沖液充分洗滌凝膠，（用玻璃漏斗過濾或置燒杯中洗滌）。
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裝柱后用0.1mol/l pH8.6磷酸緩沖液平衡。
標本可用硫酸銨粗提物，先10000g離心除去雜質，必要時用0.22μm濾膜過濾，上樣前用1mol/l pH9.0 tris-HCl 液調整標本液pH至8.6或對平衡液透析過夜。
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加樣，一般按25～30mg IgG/g濕膠比例加樣，室溫作用15min，用0.1mol/l pH8.6磷酸緩沖液充分淋洗，到淋洗液OD值為<0.02。
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用不同pH的枸櫞酸洗脫液洗脫，流速20ml/h。如純化小鼠IgG1一般用pH5.5；純IgG2a用pH4.0 ；純化IgG2b用pH3.0
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用（2）再生緩沖液洗脫剩余蛋白，洗脫后用（1）再生緩沖液平衡完成再生
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收集洗脫液測OD值，根據實驗需要透析除鹽后進行濃度、純度和活性測定。
四、注意事項
1、PA-sepharose cl-4b凝膠價格昂貴，可再生后反復使用10～20次左右。
先用10倍柱體積0.1mol/l pH8.6 tris含0.5mol/l NaCl溶液洗脫柱上的殘存雜蛋白；再用10倍柱體積0.1mol/l pH4.5醋酸鈉緩沖液含0.5mol/l NaCl溶液洗脫柱上的殘存雜蛋白；0.1mol/l pH8.0磷酸緩沖液平衡，4℃貯存。
2、SPA-sepharose cl-4b親合層析法還可用于
（1）除去抗體液中IgG，檢測非IgG抗體（如IgM）的生物學活性
（2）除去木瓜蛋白酶或胃蛋白酶水解IgG后的Fc段
（3）吸收或純化免疫復合物
3、狗、貓的多克隆IgM和IgA以及單克隆IgM和IgA也具有與SPA結合的能力。