目前HBsAg的檢測方法很多，但是在臨床實驗室檢測HBsAg的方法最常用的主要是金標法和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。常常會有患者及其他工作人員反映HBsAg檢驗結果與其他醫療單位不一致，為此常會發生醫療糾紛。因此，提高HBsAg檢測的準確性，避免假陽性和假陰性所造成的不良社會影響，是我們臨床檢驗工作者應該重視的問題。 為了減少HBsAg檢測出現假陽性和假陰性，我們有必要對這種現象的原因進行分析，在實際的檢測工作中，造成HBsAg檢測出現假陽性和假陰性主要受以下因素影響，分述如下： 1、金標法假陰性原因 1.1 檢測時間短,金標法最適判讀時間為15~30分鐘,若時間太短就會發生一些弱陽性HBsAg標本出現假陰性。 1.2 靈敏度較低，金標法>1ng/ml,而ELISA法<1ng/ml也能檢出。 1.3 層析過快，HBsAg-Ab1-Au還沒來得及與Ab2結合就越過了檢測線，這就可能造成假陰性結果。 1.4 后帶現象，即HBsAg的鉤狀效應。不管是ELISA法還是金標法，因反應原理均為“一步法”，所以當標本中HBsAg強陽性時兩者均可出現后帶現象，檢驗結果反而出現假陰性。 1.5 個別標本可能存在HBsAg亞型差異而不易檢出。 2、金標法假陽性原因 2.1 溶血或紅細胞的標本，有時會在檢測區出現一條顏色很淺的非特異型層析線，由于金標法主要是通過目視法判定結果，所以常會誤認為假陽性，應該引起重視。 2.2 為預防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗的1~2周內，血清中有時可檢出HBsAg弱陽性，形成一過性HBsAg陽性，這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg。建議接種乙肝疫苗后1個月內不應做HBsAg檢測。筆者曾多次發現此類因為注射乙肝疫苗出現的假陽性問題，但用ELISA一步法檢測仍為陰性即可消除上述干擾，其機理尚未十分清楚。 2.3 漢坦病毒會造成HBsAg金標法檢測假陽性，可能是漢坦病毒與HBsAg存在交叉性，易造成假陽性結果。 3、ELISA法假陰性原因 3.1 標本用肝素或EDTA等抗凝處理易造成HBsAg檢測結果假陰性，肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強大的負電荷,能吸附酶標記物不易洗脫有關；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統中的辣根過氧化物酶活性，造成假陰性。 3.2 標本保存不當,在冰箱內保存過久的標本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體。標本放置時間延長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱，便出現假陰性。因此若采血后不能及時檢測，5天內檢測標本分離血清置于4。C冰箱內；超過5天不能檢測的，應放在-20。C低溫冰箱中。
3.3 低濃度HBsAg標本（弱陽性HBsAg）易受加樣時間（特別是大批量標本）、試劑平衡時間、溶血程度的影響，出現假陰性。如加樣時間在30分鐘內的差異是最大的。
3.4 高濃度HBsAg在ELISA一步法檢測中易出現假陰性，即HBsAg的鉤狀效應。從原理來講，一步法中HBsAg與包被板上的HBsAb及酶結合的HBsAb結合是雙向的，當HBsAg濃度過高時，HBsAg與包被板上的抗體及酶結合物中的抗體均是單向結合，不能形成抗體－抗原－抗體酶復合物，使酶標記抗體在隨后的洗板中洗掉，從而顯出陰性結果。但是在ELISA兩步法中，高濃度的HBsAg只能與包被的HBsAb“飽和”地結合，多余部分被洗掉，隨后加入的酶結合的HBsAb正好通過HBsAg的“橋梁”作用而結合在酶標板上，顯示陽性結果。因此當HBsAg強濃度時用ELISA一步法檢測存在假陰性現象。解決此問題的最好辦法有：對標本進行稀釋；不單檢測HBsAg；采用ELISA兩步法檢測可消除漏檢現象。
3.5 由于慢性病毒攜帶者(低水平HBsAg攜帶者)或HBV感染的潛伏期,HBsAg濃度低于檢測水平的下限，由此造成假陰性。
3.6 S基因突變導致HBsAg的氨基酸結構改變，由于多數商用試劑盒檢測系統采用的為多克隆抗體檢測HBsAg的a決定簇，這一區域的點突變即可導致臨界觀測值或陰性結果，造成假陰性。
3.7 藥物的影響：高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽性的患者注射高效價乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測呈假陰性反應。用0.5M的鹽酸處理標本1小時可提高HBsAg的檢出率。
4、ELISA法假陽性原因
4.1溶血或紅細胞：有國內報道酶免HBsAg試劑檢測溶血標本時可造成假陽性，因紅細胞破壞溶解時釋放出大量血紅蛋白，血紅蛋白的亞鐵血紅素具有弱過氧化物酶活性，其作用效應與辣根過氧化物酶（HRP）類似，能與預包被抗體（Ab）結合，一步法洗脫步驟往往難以完全洗脫，殘留的過氧化物酶催化底物四甲基聯苯胺（TMB）產生假陽性。因此在采集血標本時，量不能太少，操作過程中如果血清混濁，一定要離心后再吸樣，避免紅細胞加入造成假陽性。對于溶血的標本最好重新采集血液，進行重新檢測。
4.2 標本凝集不全或標本離心處理時采用不同的離心轉速和離心時間,也可造成假陽性結果。若在血液還未開始凝固時即強行分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；離心轉速過低或離心時間過短，由于血液離心不充分均可導致假陽性。解決的辦法最好是血液標本采集后放水浴箱，使其充分凝固再用3000rpm,離心15分鐘再分離血清。
4.3 干擾物質的影響：如類風濕因子（RF）、補體、AFP等可以造成HBsAg檢測結果假陽性。RF因子可與標記二抗的Fc段結合造成假陽性；補體從C1q活化，使一抗和酶標二抗的抗體分子發生變構，Fc的C1q分子結合點暴露出來，則補體C1q可將二者連接起來造成假陽性，采用56。C30分鐘滅活補體可降低假陽性率；高濃度的AFP（如孕婦），在儲存過程中可能形成二聚體會導致本底過深造成假陽性結果。
4.4 某些細菌污染標本(如表皮球菌等),菌體中可能含有內源性HRP，造成檢測結果假陽性。
綜上所述，在進行HBsAg實驗室檢測時，為了最大限度地減少假陽性和假陰性結果的出現，在正確處理血液標本的基礎上，原則上應該采取ELISA法進行初檢,若為陽性,則用金標法進行復檢,仍為陽性,則報告結果陽性；若為陰性，則用ELISA法進行雙份血清復檢,為陽性,則報告為陽性,若為陰性,則報告為陰性。但在實際操作中，若急需獲得檢測結果或標本溶血又無法重新采集到血樣時，則可直接用金標法進行檢測，但應注明檢測方法，以便不同醫院間結果的相互比較，以及避免患者再次用同一種方法檢測造成不必要的經濟浪費，更有助于臨床醫師做出正確判斷。