方案13.1單層培養細胞更換培養液實驗

材料

無菌

培養的細胞：A549細胞，以2×10^4ml接種到25cm2培養瓶后4天……4瓶

生長培養液……………………………………………………100ml

例如：Eagle1×MEM含Hanks鹽類和4mmol/L H2CO3，無抗生素

如果培訓程序能接上，用聯系3配制的兩種培養基，1瓶保存在4℃一周，1瓶保存在37℃一周

移液管，各種刻度，清洗好，塞了棉花。如果是玻璃的，按照大小1ml、5ml、10ml、25ml，分類裝在方形吸管盒中。如果是塑料的，單個包裝并分類放在架子上

如果具備真空泵或真空管線，則用不塞棉花的吸除培養液的吸管

非無菌

吸液器或吸耳球（圖5.5、圖6.6）

連接廢液瓶與真空管線的管子，或連接廢液瓶與蠕動泵的管子（見圖5.1~圖5.3）

裝了70%乙醇的噴壺

無短絨的拭干子或抹布

吸水紙巾

帶水和消毒劑的吸管筒
防乙醇的記號筆

筆記本、筆、操作步驟等

操作步驟
1.確認干凈，并以70%乙醇擦拭，準備好超凈工作臺。

2.實驗所需的試劑及材料，瓶子以70%乙醇擦拭后立即放進超凈工作臺（見方案6.1）。

3.仔細觀察培養物是否有污染或衰退跡象（圖13.1和圖19.1）。

4.檢查前述更換培養基的標準——PH和細胞密度或濃度——以你對于該培養物行為的了解決定是否更換培養液。弱必須換液，則如下進行：

5.將培養物放于無菌工作區域。

6.打開蓋。

7.取無菌吸管，插上吸耳球或吸液器，或選擇與真空或泵連接的不塞棉花的吸管。

8. 吸舊培養基至廢液缸（圖6.8），或，更可取，通過外邊泵連接到超凈臺內的吸管吸除培養液（圖5.2、圖5.3）。



9.棄吸管。

10. 打開培養液瓶蓋。

11.去新吸管，加入同體積的新鮮培養基。如果無需檢查細胞生長，將培養基預熱至37℃是非常重要的。蓋好瓶蓋。

12.棄吸管。

13.蓋好培養瓶和培養液的瓶蓋。

14.將培養物重新放回孵箱。

15.在記錄單或實驗記錄本上完成觀察及換液記錄。

16.清走所有吸管、玻璃用品等，擦拭工作面。

提示

當培養物密度低或生長緩慢時，最好進行半量換液——即在第8步只吸除一半舊培養基，在步驟11補入相同體積的新鮮培養基。