染色體顯帶實驗_顯G帶法2

標本

磷酸緩沖液甲醇Giemsa胰蛋白酶

一、胰酶-Giemsa 混合顯帶法

1.  預處理

最中期染色體標本，置60 ℃~80 ℃溫箱中20~30 分鐘，或在37 ℃溫箱過夜；然后浸入0.025 M磷酸緩沖液中，pH6.8，56 ℃溫浴10 分鐘（不經此步亦可）；

2.  消化和染色

用現配的胰蛋白酶-Giemsa混合液消化和染色10~30 分鐘，混合液按如下比例配制
 

0.025 M 磷酸緩沖液pH6.8 73.0 ml
 

甲醇 27.0 ml
 

Giemsa干粉 50.0 mg

0.25%胰酶 0.3~0.4 ml

3.  封片

染色后用自來水沖洗（流水沖洗標本背面），入蒸餾水漂洗數次、晾干、二甲苯透明2~3 分鐘、封入中性樹脂中。

二、Giemsa 顯帶法

1.  預處理

將標本置入60~80 ℃溫箱或烤箱中20~30 分鐘；亦可在37 ℃溫箱中過夜；

2.  胰酶消化

用0.85 %的NaCl配制0.25 %胰蛋白酶溶液（微孔濾膜無菌濾過）消化3~5 分鐘（用滴加在標本上或用染色缸消化均可）；

3.  染色

取出標本片，先直立于吸水紙上除去多余胰酶液后，隨即置入Giemsa染液中，染10 分鐘；

4.  封片

自來水洗、蒸餾水漂洗、晾干、二甲苯透明2~3 分鐘、封入中性樹膠中。

1.  胰酶消化顯帶過程中，胰酶消化是重要的環節，消化不足帶不出現，消化過度，染色體變得膨脹和不著色，必須把握好胰酶濃度和消化持續時間。

2.  預處理或老化是顯帶過程中另一個重要環節，對消化和染色有很大影響，其中干熱處理是較簡便易行和效果好的辦法。