用于測定小分子抗原，如藥物、激素等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時加入待測樣本和酶標記的小分子，兩種小分子競爭與固相上的抗小分子的特異性抗體結合，溫育一定時間后洗滌，加入酶底物顯色。
特點是：
①酶標記抗原與樣品或標準品中的非標記抗原具有相同的與固相抗體結合的能力;
②反應體系中，固相抗體和酶標抗原是固定限量，且前者的結合位點少于酶標記和非標記抗原的分子數量和;
③免疫反應后，結合于固相載體上復合物中被測定的酶標抗原的量(酶活性)與樣品或標準品中非標記抗原的濃度成反比。
