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  • 發布時間:2020-09-14 20:18 原文鏈接: 沉淀反應實驗原理、材料和實驗方法(3)

    五 對流免疫電泳

    【 實驗原理 】

    當抗原和抗體在瓊脂介質中電泳時 ,抗體的 PI 比較高,在適當的 pH 值下,抗體帶正電荷而抗原帶負電荷,故在電場中抗體向陰極方向移動而抗原向陽極運動,直至相遇后形成沉淀線,其原理與雙向免疫擴散相同,但具有方法簡便,快速及一次電泳可以檢測多個樣品等特點。

    【 實驗材料 】

    1% 瓊脂糖,玻片或培養皿,凝膠打孔器(直徑 3mm),水浴箱, 5μl 微量加樣器,抗體,抗原,電泳儀,陽性對照血清,濾紙

    【 實驗方法 】

    1 )取一張玻璃片,用水沖洗干凈后,再用少量 75% 乙醇沖洗,晾干后置于水平臺備用。

    2 ) 1% 瓊脂糖融化, 56 ℃水浴中保溫

    3 )吸取瓊脂糖鋪于玻璃板上,厚約 1.5mm ),制成所需膠板。

    4 )等待瓊脂糖凝固后,用打孔器成對打孔,孔徑 3mm ,孔間距 3mm 。排距 3mm 。

    5 )在孔中分別加入抗原和抗體,每孔 5 μ l

    6 )在電場中電泳 30 分鐘( 5v/cm )

    7 )觀察結果。在兩孔間出現沉淀線的為陽性。

    【 結果分析 】

    本實驗是定性實驗,用于多種疾病的檢測,如 HbsAg , AFP 等的檢測,血吸蟲,包蟲病等抗體的測定。

    五 免疫電泳

    [ 原理 ] 在凝膠介質中將區帶電泳法與免疫雙擴散相結合的一種免疫化學方法。先使血清在瓊脂糖凝膠中電泳,在一定的電場強度下,由于血清中各種蛋白質的分子大小及電荷狀態和電荷量不同,泳動速率也各不相同,使各自組分得到分離,然后在電泳軸的平行方向挖一長槽,加入抗血清,抗原與相應抗體擴散,相遇,出現沉淀弧線。

    [ 材料 ] 1% 瓊脂糖,玻片或培養皿,凝膠打孔器(直徑 3mm ),水浴箱, 5 μ l 微量加樣器,抗體,抗原,電泳儀,陽性對照血清,濾紙
    [ 方法 ]

    1 )將玻璃板洗干凈,用 75% 乙醇沖洗,晾干備用

    2 )將 1% 瓊脂糖融化, 56 ℃水浴中保溫備用

    3 )鋪板,打孔。

    4 )將凝膠孔加滿抗原,其中一孔加電泳指示劑。

    5 )將凝膠板放在電泳槽中進行電泳 10v/cm ,根據指示劑判定電泳時間。

    6 )電泳后在凝膠板上沿電泳方向平行挖 2mm 左右寬的長槽,其中加入抗血清或特異性抗體。

    7 )將凝膠板轉入濕盒中,室溫放置 12 或 18 小時,可觀察到在一定位置出現的沉淀弧線。

    [ 結果與分析 ]

    ? 臨床上常用于 M 蛋白血癥,確認該異常蛋白屬于哪一亞類免疫球蛋白,或哪一型輕鏈。

    ? 鑒定蛋白質抗體,為單價抗體或多價抗體,如檢測多克隆丙種球蛋白血癥中同時存在的高含量 IgG , IgA 和 IgM 。

    ? 鑒定未知蛋白抗原(或抗體)。


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