流動相添加劑對基線噪音的影響

流動相添加劑對基線噪音的影響

流動相在使用之前確保經過脫氣處理，使用未經脫氣處理的流動相，基線波動比較厲害，噪音水平較高，有時也會出現鬼峰。下圖比較了脫氣與否以及脫氣方式對于基線噪音的影響。

在對一些極性可解離化合物進行HPLC分析的時候，往往需要向流動相中添加有機酸堿改性劑，如TFA等。在使用有機添加劑的時候，最好是在水相以及有機相中均添加的方式，避免由于有機添加劑混合不均勻導致的色譜基線噪音過大的情況發生。

TFA在水中的紫外吸收光譜與在乙腈中的紫外吸收光譜存在差異，因此在梯度洗脫時，基線的形狀隨梯度設置以及檢測波長設置的不同，而呈現出不同的形狀。特別地，當起始有機相比例比較低(如10%以下)，梯度斜率又比較大的時候，如下圖7所示，流動相B從5-95%(20min)，檢測波長設置為210 nm(圖7A)與254 nm(圖7B)時，在使用TFA作為有機添加劑的時候。在210 nm檢測波長下，色譜基線在3.5-5 min內出現了一個較大的上揚，在254 nm的檢測波長下，該現象不明顯。

上圖的這種現象，總的來說與以下幾個方面有關：(1)色譜柱鍵合相的碳鏈長度，C18 > C8 > C4；(2)有機相起始比例，起始比例越高，越不明顯；(3)TFA的濃度，濃度越大越明顯；(4)泵的沖程大小，沖程越小越不明顯；(5)檢測波長，越大越不明顯；(6)混合器的體積，越小越明顯。

此外，在使用強紫外吸收的添加劑的時候，注意對色譜圖上的系統峰進行區分。如下圖8A所示，0.1%TFA水以及乙腈為流動相，分別進樣比起始流動相洗脫強度弱/強的0.1%TFA溶劑，1-2 min內的正負峰均為系統峰。特別的，當使用其他保留比TFA強的添加劑的時候，如HFBA，需要注意進樣之后引起的系統峰，如下圖8B中峰1以及峰2均為系統峰且峰1與峰2的面積和理論上為零。