液相色譜儀和氣相色譜儀的儀器構造
氣相色譜儀:
氣相色譜儀由載氣源、進樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數據處理系統組成。進樣部分、色譜柱和檢測器的溫度均在控制狀態。
1、柱箱:
色譜柱是氣相色譜儀的心臟,樣品中的各個組份在色譜柱中經過反復多次分配后得到分離,從而達到分析的目的,柱箱的作用就是安裝色譜柱。由于色譜柱的兩端分別連接進樣器和檢測器,因此進樣器和檢測器的下端(接頭)均插入柱箱。
2、進樣器:
進樣器的作用是將樣品送入色譜柱。如果是液體樣品,進樣器還必須將其汽化,因此采用微機對進樣器進行溫度控制。
3、檢測器:
檢測器的作用是將樣品的化學信號轉化為物理信號(電信號)。檢測器也需要在一定的溫度條件下才能正常工作,因此采用微機對檢測器進行溫度控制。
4、數據處理系統:
該系統可對測試數據進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。
液相色譜儀:
GX液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統組成。
1、進樣系統:
液相色譜儀進樣系統一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
2、輸液系統:
液相色譜儀輸液系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為1.47~4.4×10^7Pa,流速可調且穩定,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性YZ劑或變性劑等。這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。
3、分離系統:
液相色譜儀分離系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時,可在二者之間加一連接管),內徑為2~5mm。固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成,它們都有惰性、多孔性和比表面積大的特點,加之其表面經過機械涂漬,或者用化學法偶聯各種基因或配體的有機化合物。
4、檢測系統:
GX液相色譜儀常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。
①紫外檢測器
該檢測器適用于對紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。其特點:使用面廣(如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);靈敏度高(檢測下限為10^-10g/ml);線性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
②示差折光檢測器
凡具有與流動相折光率不同的樣品組分,均可使用示差折光檢測器檢測。糖類化合物的檢測使用此檢測系統。這一系統通用性強、操作簡單,但靈敏度低(檢測下限為10^-7g/ml),流動相的變化會引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
③熒光檢測器
凡具有熒光的物質,在一定條件下,其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比。因此,這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如多環芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等)的測定,其靈敏度很高(檢測下限為10^-12~10^-14g/ml),痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。
5、數據處理系統:
液相色譜儀數據處理系統可對測試數據進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。