液相色譜常見問題及處理方法

HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

　　1、樣品量不足，解決辦法為增加樣品量

　　2、樣品未從柱子中流出。可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子

　　3、樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器

　　4、檢測器衰減太多。調整衰減即可。

　　5、檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數

　　6、檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

　　7、檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

　　8、流動相流量不合適。調整流速即可。

為什么HPLC柱柱壓過高

　　 柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

　　1、拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查（在安裝了保護預柱的情況下）；

　　2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，若壓力仍高則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

　　3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；

　　4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯系。

液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么？

　　1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

　　2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子

如何解決HPLC進行分析時保留時間發生漂移或急速變化漂移現象

　　1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

　　2、流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等

　　3、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡\

快速變化現象

　　1.流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定

　　2、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

　　3、流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合

HPLC儀器問題

　　1、我的HPLC泵壓明顯的偏高，請問可能的原因？

　　答：流速設定過高；流動相或進樣中有機械雜質，造成保護柱、柱前篩板或在線過濾器阻塞；流動相粘度過大；柱溫過低；緩沖鹽結晶；壓力傳感器故障。

　　2、基線不穩，上下波動或漂移的原因是什么，如何解決？

　　答：a.流動相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘或用充氦氣脫氣

　　b.單向閥堵塞；取下單向閥，用超聲波在純水中超20分鐘左右，去處堵塞物

　　c.泵密封損壞，造成壓力波動；更換泵密封

　　d.系統存在漏液點；確定漏液位置并維修

　　f.柱后產生氣泡；流通池出液口加負壓調整器

　　g.檢測器沒有設定在最大吸收波長處；將波長調整至最大吸收波長處

　　h.柱平衡慢，特別是流動相發生變化時；用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。

　　3、接頭處為何經常漏液，如何處理？

　　答：接頭沒有擰緊；擰松后再緊，手緊接頭以手勁為限，不要使用工具，不銹鋼接頭先用手擰緊，再用專用扳手緊1/4-1/2圈，注意接頭中的管路一定要通到底，否則會留下死體積。接頭被污染或磨損；建議更換接頭。接頭不匹配，建議使用同一品牌的配件。

　　4、進樣閥漏液是如何造成的？

　　答：a.轉子密封損壞；更換轉子密封

　　b.定量環阻塞；清洗或更換定量環

　　c.進樣口密封松動；調整松緊度

　　d.進樣針頭尺寸不合適，一般是過短；使用恰當的進樣針（注意針頭形狀）

　　e.廢液管中產生虹吸；清空廢液管

譜圖問題

　　1、問：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？

　　答：a.篩板阻塞；反沖色譜柱、更換進口篩板

　　b.色譜柱塌陷；填充色譜柱

　　c.有干擾物質的存在；使用更長的色譜柱、改變流動相或更換色譜柱

　　e.流動相PH值不合適；調整PH值，對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰

　　f.樣品與填料表面的溶化點發生反應；加入離子對試劑或堿性揮發性修飾劑或更改色譜柱

　　2、問：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？

　　答：保護柱或分析柱污染；取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質污染，運用適當的再生措施。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。樣品溶劑不溶于流動相；改變樣品溶劑，如果可能采取流動相作為樣品溶劑。

　　3、問：K值增加時，拖尾更嚴重，這是為什么？

　　答：反相模式，二級保留效應；a.加入三乙胺（或堿性樣品）b.加入乙酸（或酸性樣品） c.加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）

　　d.更換一支柱子

　　4、問：保留時間的波動有幾種可能的原因？

　　答：溫控不當；調節好柱溫。流動相組分變化；防止流動相蒸發、反應等，做梯度時尤其要注意流動相混合的均勻。色譜柱沒有平衡；在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。