本文主要對大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯膠體金快速檢測試紙條的檢測限、特異性、重復性、假陽性率、假陰性率以及影響膠體金檢測效果的主要因素等方面進行了評價。
大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯膠體金快速檢測試紙條，是以膠體金技術和免疫層析技術相結合，可一次檢測4 種抗生素的快速檢測產品。廣泛地應用于牛奶中抗生素的篩查，不需要儀器和設備，在10min 內就能檢測出結果。本文主要研究使用快速試紙條對牛奶中的抗生素進行快速檢測。
實驗部分
實驗材料
大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯膠體金快速檢測試紙條(勤邦生物技術公司)：牛奶購自超市;大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素及其他抗生素標準品(sigma)。
檢測方法與結果判斷
吸取200 μl 待檢牛奶樣品于凍存有膠體金標記抗體的微孔中，緩慢抽吸至與微孔中試劑充分混勻。將試紙條插入印有“MAX”線端朝下，使之完全浸入溶液中。20~25℃孵育5 min 后，取出試紙條觀察顏色，判定結果。
陰性(-)：C 線顯色，T 線均顯色，無論顏色深淺，均表示牛奶樣本中大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素濃度均低于檢測限。陽性(+)：C 線顯色時，T1 線不顯色，表示大觀霉素濃度大于等于檢測限;T2 線不顯色，表示鏈霉素濃慶大霉素濃度大于等于檢測限;T4 線不顯色，表示新霉素濃度等于或高于檢測限;未出現C 線，表明試紙條已失效。
圖1. 試紙條結果判定。
最低檢測限試驗
將不同濃度的大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素標準品添加的牛奶樣品分為5 組，每組樣品10 份， 大觀霉素、慶大霉素濃度分別為5、10、15、20、25 μg/L ;新霉素各組濃度分別為200、300、400、500、600 μg/L ;鏈霉素各組濃度分別為20、40、60、80、100 μg/L，分別用試紙條檢測，5 min 后觀察結果。
特異性試驗
將牛奶中常見的其他抗生素(青霉素G、頭孢洛寧、四環素等)添加到陰性牛奶樣品中，使其終濃度為500 μg/L，用試紙條重復檢測5 次，5 min 后觀察結果。
重復性試驗
分別取添加大觀霉素、慶大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L 標準品的陽性牛奶和陰性牛奶各1 份，分別用試紙條進行重復檢測20次，5 min 后觀察結果。
不同溫、濕度檢測
分別取添加大觀霉素、慶大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L 標準品的陽性牛奶和陰牛奶各5份，分別在室溫(25℃)、培養箱(37℃)和冰箱(4℃)，在氣候箱中相對濕度為30~40%， 60~70%，85~90% 時用試紙條進行檢測， 5 min 后觀察結果。
假陽性、陰性率
隨機取陰性牛奶樣品50 份， 用試紙條檢測，5 min 后觀察結果，以考察試紙條的假陽性率;隨機取添加大觀霉素、慶大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L 標準品的陽性牛奶樣品50 份，用試紙條檢測，5 min后觀察結果，以考查試紙條的假陰性率。
檢測結果與分析
試紙條最低檢測限
牛奶中大觀霉素含量、慶大霉素含量<15 μg/L 時，均出現陰性結果，大于等于20 μg/L 時，均出現陽性結果，15 μg/L 時，檢測10 份樣品中有1 份出現陽性結果，抑制率為10% ;新霉素含量≤ 400 μg/L 時，均出現陰性結果，大于等于500 μg/L 時，均出現陽性結果;鏈霉素含量≤ 60 μg/L 時，均出現陰性結果≥ 80 μg/L 時，均出現陽性結果。在本試驗條件下試紙條的最低檢測限規定為：大觀霉素20 μg/L、慶大霉素20 μg/L、新霉素500 μg/L、鏈霉素80 μg/L。
表1. 不同濃度抗生素牛奶檢測結果
表2. 試紙條重復性檢測
表3. 溫度的影響試驗
表4. 濕度的影響試驗
特異性試驗
分別對添加500 μg/L 青霉素G、頭孢洛寧、四環素、紅霉素、林可霉素、氯霉素、磺胺二甲基嘧啶的牛奶樣品檢測時，檢測線和質控線均顯色，結果為陰性，所以試紙條特異性較好。
重復性試驗
表2 結果顯示，所檢樣品中，只有1 份樣品進行慶大霉素檢測時出現陽性結果，總體陰性牛奶與陽性牛奶重復檢測結果均一，表明該試紙條重現性較好。
溫、濕度的影響
表3、4 結果表明，在25℃或相對濕度60~70% 進行檢測，未出現假陽性或假陰性結果;在37℃、4℃或相對濕度30~40% 和85~90% 時，出現假陽性或假陰性結果， 相對濕度85~90% 時，影響顯著。
假陽性、陰性率試驗
檢測50 份陰性牛奶，結果有48 份呈陰性，2 份呈陽性，即假陽性率為4%;檢測50 份陽性牛奶， 結果均呈陽性。
小結
大觀霉素、慶大霉素、新霉素、鏈霉素四聯膠體金快速檢測試紙條大大地提高了檢測效率，十分適合現場快速檢測。盡管此法目前只能達到半定量，但作為一種快速篩查的手段可以有效地彌補基層單位因設備和經費問題而導致的檢測方法的缺陷。