生化分析儀檢測部分特定蛋白，不穩定？為什么？

部分特定蛋白如類風濕因子與抗“O”等，用生化分析儀檢測為什么不穩定？

解放軍第202醫院檢驗科邱廣斌主任：臨床檢測特定蛋白多使用生化分析儀或特定蛋白分析儀，兩者的檢測原理不同。生化分析儀采用透射比濁法，是測定通過不溶性復合物到達探測器而未被散射或吸收的光線量，光通量與抗原含量成反比。特定蛋白分析儀采用散射比濁法，原理是一定波長的光沿水平軸照射，通過液體時遇到抗原抗體復合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發生偏轉，光線偏轉的角度與發射光的波長和抗原抗體復合物大小和多少密切相關，通過測定散射光的強度來反映被測成分的含量。相對而言，免疫透射比濁法的靈敏度不夠理想，檢測范圍不夠寬，原因是免疫復合物顆粒太小阻擋不了光線的通過；或是免疫復合物的數量太少，其濁度變化對光通量的透過影響不大，特別是在低濃度時更加明顯。而在抗原過量情況下，透射比濁法易出現鉤狀效應而導致結果偏低。而在速率散射比濁法檢測時，儀器設計有抗原過量檢測系統，抗原過量時會提示樣本稀釋，從而達到檢測結果的準確性和精密度。由此，在比較實驗中，速率散射比濁法在低濃度和高濃度測定中可以得到較為準確的結果。

南京軍區南京總醫院檢驗科汪俊軍主任：類風濕因子和抗O檢測一般采用免疫比濁法，通過抗原抗體之間反應形成免疫復合物，通過檢測吸光度的變化，計算被測物濃度。目前檢測多用特定蛋白儀，較生化分析儀，有以下優點：1、正常實驗之外有預反應（前）或抗原過量檢測試驗（后），避免假陰性結果。2、反應杯清洗方式不同，生化儀清洗程度可能不能徹底清洗反應物殘留。

大連市臨床檢驗中心徐維家主任：生化分析儀使用的是透射免疫比濁法，是利用抗體與可溶性抗原的反應，形成一定結構的免疫復合物，成為懸浮于反應溶液中的微粒，然后進行濁度光密度值檢測，該方法由于是檢測濁度，極易受到本底的影響，血清的黃疸溶血和脂血的狀態都會影響檢測結果，且抗原抗體反應容易存在抗原或者抗體過剩引起的鉤狀效應，只能檢測到分子量較大的蛋白，測定范圍較小，靈敏度差，部分國產試劑采用的是增強膠乳試劑，存在沉淀和混勻狀態不好等影響因素，更是導致了結果不穩定。試劑在機時間也不宜過長。

重慶市三峽中心醫院生化科杜紅心主任：部分特定蛋白如類風濕因子與抗“O”等，用生化分析儀做不穩定的主要原因在于：試劑質量差。特定蛋白生化試劑常采用膠乳增強免疫凝集法，這要求膠乳試劑（通常是R2）在機內一定時間（如一周）不分層、不沉淀，始終保持勻相狀態。部份品牌試劑達不到這一要求。我選擇這類試劑時，把R2試劑倒入試管中，3000轉/分離心10分鐘，如試管底部無沉淀物，這個試劑應該說是穩定可用的。R2試劑上機時選用容量較大的試劑盒，便于機器運行時對R2試劑有一定混勻作用。

迪瑞：因為RF與ASO項目在生化分析儀上所采用的檢測方法為免疫透射比濁法。原理為抗原抗體結合后形成免疫復合物，隨著不同濃度的抗原或抗體的加入，形成的免疫復合物會產生相應趨勢的濁度，這時候通過生化分析儀的光學系統測定免疫復合物的濁度以吸光度的方式呈現，再根據非線性校準形成的校準曲線帶入公式進行計算。

但是受到以下幾個方面的制約，導致RF、ASO在生化儀上不穩定：

1、由于很多試劑廠家為了增加試劑的靈敏度，在試劑中加入了膠乳顆粒，膠乳顆粒和試劑中的抗原或抗體會隨著試劑開封后使用的時間出現濃度跌落、失效、分層等現象，因此免疫比濁法試劑在開封效期較其他試劑短，操作人員要及時定標和更換試劑，保證測試的準確。

2、因為生化儀在測定較低值時，生化儀的靈敏度對于免疫比濁法影響較大，在很小濁度產生時，受靈敏度的制約很難檢測到，因此低值標本在生化上檢測不是很理想。

3、由于RF、ASO等采用非線性校準模式，需要5-6個校準品進行校準，易產生隨機誤差，校準是否理想對結果至關重要，因此上述兩項在生化儀上要經常性校準保證結果穩定。