生物素酰化探針的制備實驗——隨即寡核苷酸引物合成法

DNA

dNTP生物素klenow酶TEEDTALiCl乙醇

離心機培養箱

1.  在1. 5 ml 離心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA，加水至總體積為34 μl。
 
2.  在沸水中變性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋離。

3.  按順序加入下列溶液：

（1）10 μl  生物素酰化隨即多聚體

（2）5 μl  dNTP/生物素混合物

（3）1 μl  klenow酶（5U）

（4）37℃溫育1 h。
 

4.  加入3 μl 0.5 mol/l EDTA pH8.0以終止反應。加入5 μl 4 mol/l LiCl和150 μl 冰冷的無水乙醇，置于冰浴30 min。

5.  室溫高速離心10 min，沉淀用70%乙醇洗滌。

6.  DNA用20 μl pH7.5的TE緩沖液重懸。用比色法或化學發光法估價生物素酰化反應的效果。