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  • 發布時間:2021-06-29 10:00 原文鏈接: 磁珠法提取試劑常見成分及原理

    上回介紹了常見的手工法核酸提取試劑成分及原理。今天就給大家介紹一下時下最流行的磁珠法提取試劑的成分及原理吧。


    磁珠法提取試劑常見成分

    SDS(十二烷基硫酸鈉)——性質:

    1、陰離子表面活性劑:對人體微毒;

    2、優異的發泡劑:廣泛用于洗衣粉、牙膏、洗發水、滅火器;

       3、易溶于熱水:當水溫高于8℃(≈)時,SDS的溶解度隨水溫升高而急劇升高。當水溫升至70℃(≈),溶解度升高不明顯。

       SDS(十二烷基硫酸鈉)——作用:

       它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白分子的二、三級結構,使蛋白質變性。在高溫下可以破壞蛋白質與核酸的結合,促進核酸釋放。

        基聚乙二醇(Nonidet P 40 ):

       NP-40是一種很溫和的非離子型去垢劑,1%濃度基本可以破壞掉細胞膜,而對核膜的破壞作用較弱。

         弱陽離子螯合樹脂(Chelex-100):

        提取液里面bling,bling的小珠子

        是一種由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成的化學螯合樹脂,含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子,可螯合多價離子,特別是對高價金屬離子有很高的親和力和螯合作用。在低離子強度、堿性及煮沸的條件下,可以使細胞膜破裂,并使蛋白質變性,通過離心除去Chelex顆粒,使其結合的物質與DNA 分離。

       知識點:chelex-100在模板中殘留過多會影響PCR擴增哦

          蛋白酶K(Protein K):是一種從白色念珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶,具有很高的比活性,是DNA提取的關鍵試劑。DNA提取中,主要作用是酶解與核酸結合的組蛋白,使DNA游離在溶液中 。



          聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100——曲拉通)

         曲拉通X-100是一種非離子表面活性劑,在水中不解離,在溶液中穩定性高,不易受強電解質無機鹽類的影響,能與生物膜中的磷脂等脂質結合形成可溶性復合物;疏水端也能與膜蛋白的疏水區結合形成復合物,溶解于溶液中。


          異硫氰酸胍(GITC):

          強用力的蛋白質變性劑,能迅速溶解蛋白質,導至細胞結構破碎,核蛋白由于其二級結構的破壞消失而迅速與核酸分離。

          GITC也是經典RNA提取試劑TRIZOL的主要成分。

          乙二胺四乙酸(EDTA):

       是一種優良的鈣、鎂離子螯合劑。抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時需要一定的

    金屬離子作輔基)。

         Tris-Hcl:三羥甲基氨基甲烷(Tris)溶液與鹽酸混勻后形成的緩沖劑,為裂解液及核酸提供一個比較適宜的環境。

    小結

         經典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和鹽 (如 Tris、EDTA、NaCl 等)。鹽的作用,除了提供一個合適的裂解環境 (如 Tris),還包括抑制樣品中的核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞 (如 EDTA)、維持核酸結構的穩定 (如 NaCl) 等。


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