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  • 發布時間:2019-04-28 09:29 原文鏈接: 糖原染色標準操作規程

    1. 實驗原理

    過碘酸是氧化劑,使含有乙二醇基(-CHOH—CHOH)的多糖類物質(糖原粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖脂等)氧化,形成雙醛基(—CHO—CHO)。醛基與雪夫試劑中的無色品紅結合,使無色的品紅變成紫紅色化合物,定位于含有多糖類的細胞內。

    2. 標本采集

    2.1 病人準備:了解病人是否對局麻藥有過敏史。凝血因子嚴重缺陷引起的出血性疾病,穿刺部位有炎癥或有畸形,晚期妊娠婦女作骨髓穿刺時要慎重。

    2.2 標本種類:新鮮抽取的骨髓穿刺液

    2.3 標本采集要求

    2.3.1 高壓消毒的穿刺針,一次性無菌手套和抽取骨髓液的無菌注射器。

    2.3.2 臨床上首選穿刺部位為髂后上棘;翻身困難,需多部位穿刺患者可選擇髂前上棘為穿刺部位。小于3歲的小兒還可選擇脛骨頭內側為穿刺部位。

    3. 標本儲存:滴加固定液蓋滿血膜5分鐘,水洗待干室溫避光保存。

    4. 標本運輸:室溫運輸

    5. 標本拒收的標準:溶血、稀釋標本不能作測定

    6. 試劑

    6.1 試劑名稱:血細胞PAS染色測定

    6.2 試劑生產廠家:上海太陽生物技術公司

    6.3 試劑組成

    試劑1:PAS固定液,10%甲醛甲醇溶液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。

    試劑2:PASⅠ液,10g/L(1%)過碘酸溶液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。

    試劑3:PASⅡ液,又稱Schiff氏液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。

    試劑4:蘇木素復染液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。

    7. 操作步驟

    7.1 涂片滴加固定液5-8滴,蓋滿血膜即可,5分鐘,水洗待干。

    7.2 滴加Ⅰ液10分鐘,水洗待干。

    7.3 置入Ⅱ液內室溫(20~25℃左右為宜)暗處放置30分鐘,然后流水沖洗數分鐘。

    7.4 蘇木素復染1~2分鐘,水洗待干,鏡檢。

    8. 結果判斷

    8.1 陽性結果—細胞內出現紅色沉淀物,定位于胞質。

    8.2 陰性結果—細胞內無紅色沉淀物。

    9. 臨床意義

    9.1 粒細胞系統自早幼粒階段以下均可呈陽性,且隨細胞分化而加強。

    9.2 單核細胞系統可呈彌散狀弱陽性伴細顆粒狀。

    9.3 淋巴系統可呈快狀或粗顆粒狀陽性。

    9.4 巨核細胞系統(血小板)可呈粗塊狀或團塊狀陽性。

    9.5 紅細胞系統正常情況下呈陰性,當某些疾病時可呈陽性,如MDS,AML-M6時。

    10. 操作性能:快速簡便,特異性強,靈敏度高。

    11. 方法局限性

    11.1 標本應新鮮,且未受其他化學物品污染。

    11.2 滴加Ⅰ液后水洗應充分,然后待涂片完全干燥后才能置入Ⅱ液內。

    11.3 PASⅡ液保存不當或時間過久將會變紅,并使陽性強度降低,且不能反復使用。

    12. 參考文獻

    12.1 葉應嫵,王毓三,等,全國臨床檢驗操作規程,第三版,中華人民共和國衛生部醫政司,2006

    12.2劉成玉主編﹒臨床檢驗基礎實驗指導﹒第二版·人民衛生出版社,2003


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