細胞的傳代培養實驗

體外培養的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代，以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續。培養的細胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養枯竭，將培養的細胞分散，從容器中取出，以1:2 或l:3 以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養。
 

細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6 次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100 個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。
 

細胞接種2～3 天分裂增殖旺盛，是活力最好時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。

HeLa細胞

1640培養液PBS胰蛋白酶EDTA混合消化液

培養瓶吸管離心管煤氣燈超凈工作臺二氧化碳培養箱倒置顯微鏡

1.  將長成單層的原代培養細胞或HeLa 細胞從二氧化碳培養箱中取出，在超凈工作臺中倒掉瓶內的培養液，加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜)，靜置5～10 分鐘。

2.  在倒置鏡下觀察被消化的細胞，如果細胞變圓，相互之間不再連接成片，這時應立即在超凈臺中將消化液倒掉，加入3～5 ml 新鮮培養液，吹打，制成細胞懸液。

3.  將細胞懸液吸出2 ml 左右，加到另一個培養瓶中并向每個瓶中分別加3 ml左右培養液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養箱中，繼續進行培養。

4.  結果
 

一般情況，傳代后的細胞在2 小時左右就能附著在培養瓶壁上，2～4 天就可在瓶內形成單層，需要再次進行傳代。

1.傳代培養時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次最好只進行一種細胞的操作。每一種細胞使用一套器材。培養用液應嚴格分開。

2.每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。

3.如發現細胞有污染跡象，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BSS或培養基反復清洗，隨后培養基中加入較大量的抗菌素，并經常更換培養基等。

傳代培養可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行，每一步都需要認真仔細的無菌操作。

內容來源：中國醫科大學實驗指導手冊。