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  • 發布時間:2019-04-30 21:51 原文鏈接: 細胞生長檢測2:MTT檢測法

    MTT檢測法

    1.96孔細胞培養板,每孔中加0.1ml2×10410×104靶細胞的培養液(含10%小牛血清的RPMI-1640培養液),在37 5 CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養23小時讓細胞帖壁(如果是懸浮細胞可直接進行下一步)

    2.RPMI-1640培養液210倍遞次稀釋細胞因子標準品,根據情況25倍遞次稀釋待檢樣品,每孔加0.1ml稀釋的標準品和待檢樣品,每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個:3個陽性對照孔,每孔加0.1ml含大劑量細胞因子的RPMI-1640培養液,3個陰性對照孔,每孔加0.1ml RPMI-1640培養液。在37 5 CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養2448小時或預定的時間。

    3.吸去培養液,用PBS洗滌一次(如為懸浮細胞,應在吸去上清液前離心培養板)。

    4.每孔加0.1ml PBS10μl MTT染液,在37 5 CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養46小時。

    5.每孔加0.1ml酸化異丙醇,也可用含10 SDS10mmol/L HCl代替酸化異丙醇,在振蕩器上振蕩混勻,讓還原產物充分溶解。置酶聯檢測儀上測定光密度(OD)值,檢測波長570nm,參考波長630nm。以OD值對樣品稀釋度作圖,比較標準曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。


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