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  • 發布時間:2019-03-29 18:37 原文鏈接: 肽類的電泳(TricineSDSPAGE)實驗

    實驗方法原理在定量分析蛋白質混合物方面,最廣泛采用的蛋白質組學方法就是 SDS-PAGE。

    因為它根據蛋白質的大小不同分離蛋白,所以對于檢測蛋白純度特別有用,同時也應用于蛋白質相對分子質量(Mr) 的測定。影響到 SDS-PAGE 蛋白分離效果的因素有:

    ①丙烯酰胺與交聯劑(雙丙烯酰胺)的比例;

    ②用于制備濃縮膠和分離膠的丙烯酰胺/雙丙烯酰胺的比例;③濃縮膠和分離膠緩沖液 pH 及成分;

    ④樣品制備的方法。

    典型 Laemmli 膠系統(Laemmli,1970) 采用甘氨酸電泳緩沖液,能分離分子質量范圍. 約 3000?200000Da 的蛋白。本方案中使用的是 ScMgger 和 vonJagow(1987) 的 tricine 凝膠系統,其中用 tricine[三(輕甲基)甲基甘氨酸] 代替了甘氨酸。這一系統可以分離小至 500Da 的肽類,適合 SDS-PAGE 肽圖譜以及制備氨基末端、羧基末端測序的樣品
    實驗材料

    蛋白溶液或塊狀細胞蛋白

    試劑、試劑盒

    下槽緩沖液分離膠混合物濃縮膠混合物上槽緩沖液

    實驗步驟

    1.按方案 1 制備不連續凝膠。

    2.分別往電泳上槽和下槽中注入對應的電泳緩沖液。

    3.按方案 1 的方法制備凝膠的蛋白質上樣樣品。

    4.每塊膠以恒流 25mA,從負極到正極開始電泳。

    5.選用方案 2 或方案 7 中介紹的考馬斯亮藍或銀染法使蛋白顯現。


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