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  • 發布時間:2019-10-15 10:24 原文鏈接: 菌脂多糖的制備

    實驗原理

    熱酚提取法的原理是將細菌懸液加于熱酸——水混合液中,冷卻,離心混合液可分為水溶液層,內含水溶性脂多糖及核酸等及酸層、內含蛋白質。近年來發現在酸層中也含糖類。經離心后沉淀含細胞殘體。

    主要設備

    高速離心機,水浴鍋,冰箱,試管,超聲儀,透析袋等。

    實驗步驟

    1. 熱酚提取法: 

    1) 細菌濃懸液用鹽水經2500轉/分,20分鐘離心洗滌一次。

    2) 將沉淀的菌混勻于蒸餾水中,放66℃水浴,然后滴加等量的90%熱酚溶液(預熱至66℃),邊加邊搖,而后在66℃水浴中攪拌25分鐘。 

    3) 在水浴中冷卻,于4℃冰箱過夜。 

    4) 以2000轉/分離心15分鐘。 

    5) 將上層水溶液吸到另一試管中。 

    6) 剩下的酚層及殘渣組分可再加上述同量水在熱水浴中攪拌30分鐘,冷卻,離心,取上層水溶液。將兩次提的水溶液混合,置透析袋中于生理鹽水中透析2天,其間換幾次鹽水,以除去酚。 

    7) 透析后的水溶液層經濃縮(如用聚乙二醇在透析袋外層涂抹以除去水分)。即成粗制脂多糖,于冰箱內保存備用。 

    2. 超聲波處理法 

    1) 獲得的菌液經2500轉/分,20分鐘離心洗滌1—2次,將沉淀配成2倍于濕菌濃度的濃菌液。 

    2) 用超聲波發生器中頻(約相當于12000cps)處理20分鐘。

    3) 處理液經3000轉/分,離心30分鐘,吸取上清液即為脂多糖抗原。置4℃冰箱保存備用。 

    3. 煮沸法

    將培養后得到的濃菌液沸水浴煮沸2小時。置冰箱靜置兩星期以上(使菌體殘渣自由下沉)。3000轉/分離心30分鐘,取上清夜即為粗脂多糖抗原,置冰箱中保存備用。


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