實驗方法原理 原理是將細菌懸液加于熱酸——水混合液中,冷卻,離心混合液可分為水溶液層,內含水溶性脂多糖及核酸等及酸層、內含蛋白質。近年來發現在酸層中也含糖類。經離心后沉淀含細胞殘體。
實驗材料 細菌濃懸液
試劑、試劑盒 熱酚鹽水
儀器、耗材 離心機培養箱透析膜
實驗步驟
1. 細菌濃懸液用鹽水經2500轉/分,20分鐘離心洗滌一次。
2. 將沉淀的菌混勻于蒸餾水中,放66℃水浴,然后滴加等量的90%熱酚溶液(預熱至66℃),邊加邊搖,而后在66℃水浴中攪拌25分鐘
3. 在水浴中冷卻,于4℃冰箱過夜
4. 以2000轉/分離心15分鐘
5. 將上層水溶液吸到另一試管中
6. 剩下的酚層及殘渣組分可再加上述同量水在熱水浴中攪拌30分鐘,冷卻,離心,取上層水溶液。將兩次提的水溶液混合,置透析袋中于生理鹽水中透析2天,其間換幾次鹽水,以除去酚。
7. 透析后的水溶液層經濃縮(如用聚乙二醇在透析袋外層涂抹以除去水分)。即成粗制脂多糖,于冰箱內保存備用。