蛋白質的生物合成標記實驗（二）

細胞

PBS甲硫氨酸

培養箱離心機

1.  在100 mm 直徑的培養皿上培養貼壁細胞（0.5~2×10⁷）至70%~90%匯片，吸去培養液，用10 ml 于37℃短時間標記培養基輕輕搖晃冼兩次細胞。

2.  加入5 ml 于37℃短時間標記培養基，在5%CO₂的加濕培養箱于37℃溫育15 min，以耗盡細胞內的甲硫氨酸。

3.  制備［³⁵S］甲硫氨酸工作液。

4.  除去細胞上的培養液，加入2~4 ml ［³⁵S］甲硫氨酸工作液，在5%CO₂的加濕培養箱于37℃溫育30 min~3 h。

5.  除去細胞上的培養液，用10 冰冷PBS緩沖液洗細胞1次后棄去，加入10 ml 冰冷PBS刮下培養皿上的細胞。

6.  將細胞懸液移至15 ml 圓錐試管，于4℃ 300 g 離心5 min，棄上清。

7.  處理和分析細胞。