血小板衍生生長因子(PDGF)的檢測方法

血小板衍生生長因子（PDGF）的檢測

血小板衍生生長因子（plateletderivedgrowthfactor，PDGF）能刺激成纖維細胞、神經膠質細胞、血管內皮細胞和平滑肌細胞的分裂增殖，以及誘導成纖維細胞、血管平滑肌細胞、單核細胞和中性粒細胞趨化。人皮膚成纖維細胞AGl523可作為檢測PDGF誘導細胞株增殖活性的靶細胞。

1．用含10％FCS的MEM培養液培養AGl523細胞，于檢測前用0．25％胰蛋白酶消化生長的細胞。每個35mm培養皿中加入3X104細胞／2mL，置37~C，5％C02條件下培養養2d，洗去培養液。

2．加入系列稀釋的待測樣品、0．1mg／mL人血清白蛋白、0．02uCi（740Bq）3H-TdR和無血清的MCDBl05培養液，總體積為lmL，繼續培養48h。

3．吸去上清液，用3～4mL 5％三氯醋酸（TCA）溶液固定細胞10min，吸去TCA并洗滌，室溫自然干燥。

4．加入0．5mL含1％SDS的0．3mol／LNaOH溶解細胞15min，將溶解物轉移到液體閃爍管中，加5mL閃爍液，通過p-計數儀計數cpm。約3ng／mL（0．1mmol／L）PDGF可誘導50％3H-TdR的攝人。

BALB／c 3T3細胞可作為檢測PDGF促增殖作用的靶細胞，在96孔細胞培養板中進行。可采用’H-TdR摻入法或MTF法等測定增殖細胞數。但其他細胞因子對3T3細胞也有促增殖作用，可用相應的中和抗體作阻斷試驗。 血小板衍生生長因子（Platelet derived growth factor，PDGF）是貯存于血小板α顆粒中的一種堿性蛋白質。是低分子量促細胞分裂素。能刺激停滯于G0/G1期的成纖維細胞、神經膠質細胞、平滑肌細胞等多種細胞進入分裂增殖周期。血小板衍生生長因子PDGF于1974年發現的一種刺激結締組織等組織細胞增長的肽類調節因子，因其來源于血小板而得名，正常生理狀態下存在于血小板的α顆粒內，當血液凝固時由崩解的血小板釋放出來并且被激活，具有刺激特定細胞趨化與促進特定細胞生長的生物活性。此外，在組織受到損傷時巨噬細胞、血管平滑肌細胞、成纖維細胞、內皮細胞、胚胎干細胞等也可以合成并釋放PDGF。肝臟受損時，巨噬細胞、血小板、浸潤的炎細胞、受損的內皮細胞及激活的肝星形細胞均可以分泌PDGF。以自分泌、旁分泌的方式發揮作用。結合的PDGF是分子量為30KD的熱穩定糖蛋白，是靠二硫鍵相連的A、B兩條多肽鏈組合成的二聚體