血清滅活問題

1、問：加到培養基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實驗了，我在使用Gibco南美血清10270106的時候，都不滅活。

2、問：Gibco胎牛血清新西蘭（Gibco新西蘭血清10091148）滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養大多數的腫瘤細胞，血清一般是不需要滅活的，例如經常使用Gibco新西蘭胎牛血清，是不用熱滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長因子。但是如果用于培養一些表面具有補體受體的細胞，如內皮細胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問：我要做滋養細胞培養，Gibco北美胎牛血清要滅活嗎？

答：一般的細胞培養中使用到的Gibco胎牛血清，例如Gibco ES專用胎牛血清是不用滅活的。如果一定需要滅活，可以直接購買Gibco胎牛血清澳洲熱版本，進口Gibco澳洲胎牛血清熱滅活的一般都已滅活。滅活的Gibco血清價格一般比未滅活的Gibco血清價格要高很多。

4、問：我用病毒上清轉染細胞，培養用的血清需要滅活嗎？因為血清中可能有些補體和抗體，是不是會影響轉染？我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結合，影響轉染，正確嗎？細胞是單核細胞白血病細胞，病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養基加病毒孵育幾小時，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無血清培養基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主結合過程的干擾，一般是2-6小時，根據細胞的狀態決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補體滅活！這要根據實際情況而定，如果沒有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個小時。

5、問：(1)我買的是Gibco胎牛血清北美，要滅活嗎？有些說法是需要，有些說直接解凍后就可以加入到培養基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有關系嗎？

答：關于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數實驗室將血清的熱滅活還是作為常規來執行，因為有兩個作用，第一是滅活補體，第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負面影響。

我在實驗室處理Gibco胎牛血清新西蘭的時候，有一次水浴箱在滅活過程中出現故障，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀，我重新處理了另外一份Gibco胎牛血清南美，將兩份血清對比，發現高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以上，肯定也會對里面的蛋白起到破壞作用。下次有機會我做個延長滅活時間的實驗試試，看看到底有多大的影響。熱滅活之后，血清放在四度冰箱久了，就會有沉淀產生，這常常會被認為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗證到底有沒有污染，常常又會把血清放置37℃溫育，但是血清中的蛋白會進一步析出，最后還是要做鏡檢，無菌培養試驗，和革蘭氏染色試驗，非常麻煩。

我看過一份資料，里面提到70%的實驗者認為滅活是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等。其中最常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經不再成立，只有少數對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。有人比較過11個不同細胞株，發現其中熱滅活對6 個細胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纖維細胞，MRC-5)的生長帶來負面影響，三個細胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響，而只有兩個細胞株(Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid)，在熱滅活之后，細胞生長有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細胞的生長沒有明顯的促進作用。

你可以摸索一下，Gibco北美血清16000044從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍，然后混勻分裝成兩份，一份滅活，一份不滅活，比較這兩種Gibco北美血清對細胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個過程最多也就一個星期。同時你還要考慮血清滅活與否對你后續的實驗有沒有影響。

問：(2)分裝后的Gibco澳洲血清10099141血清從-20℃取出放4℃讓其液化，卻見Gibco澳洲血清10099141血清比較混濁，有沉淀產生，這屬正常嗎？

答：正常。