酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同。光源燈發出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔極中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號.電信號經前置放大，對數放大，模數轉換等信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算，最后由顯示器和打印機顯示結果. 。微處理機還通過控制電路控制機械驅動機構X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現自動進樣檢測過程。而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測，因此省去了X,Y方向的機械驅動機構和控制電路，從而使儀器更小巧，結構也更簡單。
微孔板是一種經事先包埋專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內都包埋著相應的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液.
光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光，但對綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。
隨著檢測方式的發展，擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀，可檢測吸光度（Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光（TRF)、熒光偏振（FP)、和化學發光（Lum)。
酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內的任意波長，而濾光片型酶標儀則根據選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。
檢測單位
光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。
檢測單位用OD值表示， OD是optical density（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD=log（1/trans），其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關系：
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度， Ιo 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。
在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長，在此波長下，此物質能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。
但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
檢測值計算
儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉換成二進位數字信號，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%，沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中，檢測物的透光值均在 0%一100%之間。透光值
的計算如下：
T=（Meas—Min）/（Max—Min）
其中T為透光值， Meas為檢測的二進位數值， Min為在 0%的情況下檢測的二進位數值， Max為在100%的情況下檢測的二進位數值，舉例如下：
MaX=3600
Min=20
Meas=30
T=（30-20）/3600-20)=0．0028
OD=log（1/T）=log（1/0.0028）=2.552
中心定位
儀器會自動對酶標孔進行中心定位，中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。在對每一個酶標儀進行檢測時，儀器其實要進行35個點的測量，選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來校準由于電壓不穩或燈泡磨損帶來的影響。
用途和其它提示
用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實驗室，包括臨床實驗室。
質量控制
質量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質量控制。
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