食品中微生物限度檢驗方法驗證初探

　　摘要：運用微生物限度檢查方法對飲料進行微生物限度驗證，通過實驗分析得出有一個品種對金黃色葡萄球菌具有明顯的抑菌作用，回收率不足百分之七十，證明GB4789.1～GB4789.31-2010微生物限度檢查存在局限。 
　　從衛生的角度對食品質量進行評價，是眼下比較重要的一種的測評方法，是人們飲食安全的保證，本文挑選了3批飲料作為微生物限度檢查方法的驗證對象。 
　　1 實驗所要使用的儀器、菌種和樣品 
　　1.1 儀器 
　　滅菌器（LMQC12360J）、潔凈工作臺（SCW—CJ—2FD）、電熱鼓風干燥箱（101-2）、生物安全柜（BHC-1300ⅡA2）。 
　　1.2 菌種 
　　菌種都來自黑龍江省食品藥品檢驗所取得的，均為第3代。 
　　1.3 樣品 
　　檸檬口味運動飲料，20110506，廣州省百事有限公司樣品；西柚汁，20110618，農夫山泉股份有限公司樣品；仙怡果園酸角飲品，20110904，保山市仙怡飲料廠樣品。 
　　2 對細菌、霉菌及酵母菌計數方法通過實驗進行驗證 
　　2.1 制作所需菌液 
　　（1）把挑選的三種樣品的菌種放置于營養肉湯中進行細菌培養，在35℃的溫度中，培養18～24h之后，分別取三種樣品的培養肉湯1ml+9ml，把它們進行稀釋，濃度稀釋到10-5～10-7，讓它們保持在50～100cfu/ml，為以后做活菌數檢查做準備。 
　　（2）把白色念珠菌菌種放置于改良馬丁培養液中進行培養，在25℃的溫度中，培養18～24h，然后取出1ml+9ml培養液體，把它們進行稀釋，稀釋到10-5～10-7，讓它們的濃度保持在50～100cfu/ml，為以后做活菌數檢查做準備。 
　　（3）把上文中提到的三種菌種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌種10-5～10-7的稀釋液，取出各1ml，然后采用營養瓊脂培養的培養基20ml注射到器皿中，對兩個器皿進行平行檢測，30℃～35℃的溫度下，恒溫培養48h，進行細菌計數，挑選大概 50～100cfu/ml左右的稀釋液，當做試驗菌液組菌液。 
　　（4）量取白色念珠菌菌種的稀釋液體10-5～10-7，分別1ml，然后選用玫瑰紅鈉瓊脂培養的培養基20ml，注射到器皿中，對兩個器皿進行平行檢測，30℃～35℃的溫度下，恒溫培養48h，進行細菌計數，挑選大概50～100cfu/ml左右的稀釋液，當做試驗菌液組菌液。 
　　2.2 制作所需的供試液 
　　挑選各物質的原液進行常規方法的檢測，把各種物質的原液10ml加入0.1%蛋白胨氯化鈉90ml進行稀釋，稀釋之后的稀釋液作為稀釋法檢驗的供試液。 
　　2.3 驗證試驗 
　　2.3.1 菌種液體組 檢測每一組加入的試驗菌數目。 
　　2.3.2 試驗組 常規法：量取1ml的供試液，以及50～100cfu供試驗用的試驗菌，然后把它們注射到兩個器皿中，馬上分別倒入瓊脂培養的培養基。要求每一個菌株分別制作2個平皿，按照平皿法分別測評它們含有的菌種數。 
　　培養基稀釋法：分別量取0.5ml、0.2ml、0.1ml按照1：10的比例稀釋過的供試液和50～100cfu供試驗用的試驗菌，然后把它們分別注射到器皿中，馬上分別倒入瓊脂培養的培養基。要求每一個菌株分別制作2個平皿，按照平皿法分別測評它們含有的菌種數。 
　　2.3.3 供試品對照組 量取供試樣品原液1ml ，把它注射到2平皿，按照菌落計數法，檢測供試樣品中本底菌數。 
　　2.3.4 回收率計算 把相關的數據帶入到公式中，對試驗組的菌種回收率進行計算。 
　　試驗組的菌種回收率=[（試驗組平均菌落數—供試品平均菌落數）/菌液組平均菌落數]×70%。 
　　2.3.5 結果 通過常規法試驗，分別進行3次平行，進行結果比對。菌種在30℃～35℃的溫度下，培養3天，挑選的白色念珠菌在23℃～28℃的溫度下，培養5d。按照平皿法進行菌落數的計算，同時對菌數回收率進行公式運算，結果見表1。 
　　經過常規試驗法證明，在0.2ml/皿供試液時，能夠消除這種樣品菌種對金黃色葡萄球菌菌種生長的抑制作用。結論見表2。 
　　GB4789.1～GB4789.31—2010，這個標準只是食品檢查的一般標準，它帶有很大的局限性。因為環境的不同，對結果的影響具有不確定性，所以，應該對食品衛生標準進行增補。 
　　參考文獻 
　　[1]國家藥典委員會.中國藥典（二部）[S].2010. 
　　[2]衛生部.GB/T4789.1～4789.31-2010. 
　　[3]汪穗福，張新妹，蔡芷荷.微生物驗證技術[M].中國醫藥出版社.