1 范圍
本標準規定了以高效液相色譜（HPLC)測定飼料中金霉素的方法。
本標準適用于配合飼料、濃縮飼料和預混合飼料中金霉素的測定，檢測限為1n g，最低檢出濃度為4 mg/kg.
2 規范性引用文件
下列文件中的條款通過在本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所
有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。
GB /T 6 682 分析實驗室用水規格和試驗方法
GB /T 14699.1 飼料采樣
3 方法原理
使用鹽酸-丙酮溶液提取飼料中的金霉素，調至pHl.0 -1.2 ，振蕩，過濾，注人反相柱分離，紫外檢測器檢測，外標法定量分析。
4 試荊和材料
本標準所用試劑，除特別注明外，均為分析純。水為蒸餾水，色譜用水為去離子水，符合GB/T 6682用水的規定。
4.1 氫氧化鈉溶液：400 g/L.
4.2 乙二酸（草酸）溶液：[c(1/2HZC20,)=0.01 mol/L].
4.3 鹽酸溶液：[c(HCI)=4 mol/L].
4.4 提取液：丙酮十鹽酸溶液（4.3)＋水＝13十1十6.
4.5 流動相：乙二酸溶液（4.2)＋乙睛（色譜純）＋甲醇（色譜純）=10十3十2.
4.6 金霉素標準液：
4.6.1 金霉素標準儲備液準確稱取金霉素標準品0.012 90g（含量大于96.9%，儲存于硅膠干燥器中），精確至0.1 m g，置于50m L容量瓶中，用提取液（4.4)溶解并定容至刻度，搖勻，其濃度為250g /L,
貯于4℃～ 6℃ 冰箱中，有效期為一周。
4.6.2 金霉素標準工作液準確移取4 mI一金霉素標準儲備液（(4.6.1)于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，其濃度為100 g/L，現用現配。
5 儀器、設備
5.1 離心機：3 000 r/mine
5.2 pH計：精度0.0 1m V.
5.3 恒溫振蕩器：300 r/min.
5.4 微孔濾膜（孔徑0. 45 pm).
5.5 分析天平：感量0. 1 mgo
5.6 分析天平：感量0.0 1m g.
GB/T 19684-2005
5.7 GE-200高效液相色譜儀 GE-200高壓輸液泵，GE-200紫外檢測器，浙大智達N2010色譜工作站，VertexC18色譜柱。
6 試樣的選取和制備
按 G B/ T 14699.1 選取有代表性樣品200g -500g ，用四分法縮至100g ，粉碎通過0.45m m孔徑篩，充分混勻，貯于磨口瓶中備用。
7 分析步驟
7.1 稱取試樣lg-10g（金霉素含量大于等于40m g/kg)，準確至0.1 m g，置于具塞錐形瓶中，加人
100 mL提取液（4.4)，手搖2 min，再用鹽酸溶液（4.3)調pH至1. 0-1. 2(記錄鹽酸溶液的消耗量，作為稀釋倍數），蓋緊塞子，置恒溫震蕩器（5. 3)中（振蕩速度110 r/min)振蕩30 mine
7.2 將提取液（7.1）倒人離心管，3000 r/min離心15 min,
7.3 取離心上清液用濾膜（5.4)過濾，濾液作為試樣溶液。
7.4 HPLC測定參數的設定：
分 析柱 C18：柱長150mm，內徑4.6mm，粒度5um（或類似分析柱）；
柱 溫 ：室 溫；
檢 測 器 ：紫外檢測器，檢測波長375nm;
流 動 相 速度：1.0 m L/min;
進樣 量 ： 10ul-20ul
7.5 定量測定：采用多點外標法，根據濃度與峰面積的線性回歸方程計算金霉素的含量（g/L)
8 測定結果的計算
8.1 每千克試樣中所含金霉素的質量X(mg）按式（1)計算：
X＝m1\×n
式 中 ：
X— 每千克試樣中所含金霉素的質量，單位為毫克（mg);
M1--HPLC試樣色譜峰對應的金霉素質量，單位為微克（ug);
m— 試樣質量，單位為克（g）；
n— 稀釋倍數。
8.2 測定結果用平行樣測定的算術平均值表示，保留至小數點后1位。
9 允許差
兩個平行測定結果的相對偏差不大于7％0