高效鑒定人參中的有效成分（二）

數據處理工作流程

通過智能DBS-IDA采集方法，一次進行獲得高分辨的TOF?MS和TOF?MS/MS，高分辨的TOF MS通過PeakView進行目標化合物以及非目標化合物的提取或結構特征提取發現可能的中藥成分，通過Formula Finder計算其分子組成，再結合高分辨TOF MS/MS進一步做結構分析，以確定化合物，分析流程如圖2所示。

結果與討論

目標化合物的篩查與鑒定

人參主要成分為三萜皂苷類，在負離子模式下，很容易產生加合離子，本實驗的流動相中含有甲酸，人參皂苷的分子離子為加合醋酸的離子，根據苷元的不同分為二醇型皂苷和三醇型皂苷，其在負離子條件下產生三醇型皂苷特征性碎片475.38，二醇型碎片459.38，結構特點如圖3所示。

使用PeakView軟件中的XIC manager對人參皂苷目標化合物篩查，將人參皂苷目標化合物序號或名稱和分子式信息導入到軟件中的XIC manager，即可篩查目標化合物，可根據4大標準（保留時間、質量精度、同位素比例、譜庫）判斷篩查到的色譜峰是否為目標化合物。

圖4.  人參皂苷類成分篩查結果。

利用已知的68種人參皂苷類成分，篩查到37種人參皂苷類成分，提取離子流色譜圖、測得的精確質量數以及保留時間、強度和質量準確度簡單直觀顯示出來，并同時根據獲得的高分辨TOF MS和TOF MS/MS進一步的確證，篩查結果如圖4所示。

人參皂苷中有多種同分異構體，僅通過高分辨的TOF MS不能確定，如人參皂苷Re & Rd分子組成均為C49H84O20，必須通過高分辨的MS/MS進一步確定結構。圖5展示了根據人參皂苷的結構特點，并結合高分辨MS/MS對人參皂苷結構的推測。

圖5.  推斷左為人參皂苷三醇苷Re，右為人參皂苷Rd，各碎片的質量準確度均較高。

PeakView軟件解析化合物的結構

根據一級質譜的質量精度、同位素比例、不飽和度等信息，運用PeakView軟件推測可能化合物分子式，同時也能給出MS/MS的分子組成。在PeakView軟件中導入化合物結構式，可對二級碎片結構進行預測。

查找結構相關化合物（NLF, PIF）

中藥成分中同一類成分都具有相似的母核或結構特征，如會產生相同的碎片或具有相同的中性丟失部分，因此可通過中性丟失過濾（NLF）和產物離子過濾（PIF）查找結構相似的化合物。根據人參皂苷的結構特點，人參三醇苷能產生475.3的碎片以及人參二醇苷能產生459.3的碎片，可通過PIF找到滿足特點的人參皂苷，同時可通過人參皂苷上結合糖的部分在ESI模式下，很容易中性丟失糖 162.053，146.058，可通過NLF來找到滿足中性丟失六碳糖的皂苷類成分，滿足這些特征的離子提取，同時滿足條件的離子在TOF?MS上會以紅色標記，同時得到的MS/MS可進一步進行確認，從而能夠全面地完成人參皂苷類成分的分析鑒定。通過目標代謝物以及PIF、NLF方式，共鑒定出人參皂苷類成分45種，結果如表1所示。

小結

高分辨質譜具有簡單的數據采集流程，可應對中藥成分分析的要求，但如何在高分辨數據中快速發現和鑒定目標結構的化合物，已成為中藥成份研究的限速挑戰。憑借TripleTOF 5600系統的高掃描速度、高分辨以及高質量準確度，可同時獲得高分辨的TOF MS和TOF MS/MS，能通過目標化合物提取以及PIF、NLF處理獲得的高分辨數據，快速簡便地查找到目標化合物。實驗結果表明：所獲得的各成分均具有較高的質量準確度，質量準確度均小于2ppm。