DNA點雜交
l DNA斑點印跡的制備
預備
1.冰浴中以70W左右的超聲波處理基因組DNA 1min,用瓊脂糖凝膠電泳檢測片段大小,這些片段大小均應為7~10kb。
2.用TE緩沖液將DNA稀釋至0.5μg/μl。
斑點印跡的制備
1.加熱5μg DNA(在10μl TE緩沖液中)至95℃ 10min,冰浴5min。用微量離心管短暫離心收集液滴,置冰浴。
2.裁一張大小合適的濾膜,用鉛筆在濾膜上畫25px的方格網以標記DNA點樣的位置。
3.濾膜先用蒸餾水稍微浸濕,并用20×SSC使其飽和。將膜放在經20×SSC預飽和過的濾紙(Whatman 3MM)上。
4.以5μl的DNA分裝樣品在濾膜上點樣,待前一個樣品干燥后再點第二個樣品。
5.將濾膜放在一張干燥的濾紙(Whatman 3MM)上稍微晾干,以5×SSC漂洗5min。
6.將DNA固定于膜上,硝酸纖維素膜需置80℃真空烤爐2h。當尼龍膜仍潮濕時,應用Saran包裝膜(或任何類似的塑料薄膜)包裹,將DNA面朝下置紫外透射儀上,紫外線(280mn)照射3~5min,這時的濾膜已可用于雜交。