DNA純化實驗

硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA，又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性，所以被分離開來。

PCR產物

PCR清潔試劑盒

96孔DNA制備板 96孔深孔板 96孔V型底板

一、試劑盒組成、貯存、穩定性
 

1.  說明書，耗材：96孔DNA制備板，96孔1.6 ml深孔板，96孔V型底板。
 

2.  Buffer PCR-A：DNA結合溶液。室溫密閉貯存。若出現沉淀，應于65℃溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。
 

3.  Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，根據瓶上指定的體積加入乙醇，混合均勻，室溫密閉貯存。可用100%乙醇或95%無水乙醇。
 

4.  Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5。室溫密閉貯存。
 

二、操作步驟
 

用戶可以選擇負壓法或離心法。
 

A. 負壓法
 

1A.  正確連接負壓裝置，將96孔DNA制備板置于負壓裝置上；在PCR、酶切、酶標或測序反應液中，加3個體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 ul，加至100 ul）；混合均勻后轉移到96孔DNA制備板中，開啟并調節負壓至-25-30英寸汞柱，緩慢吸掉板中溶液。
 

2A.  加0.3 ml Buffer W2，吸盡管中溶液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌兩次。
 

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。
 

3A.  保持負壓將96孔DNA制備板抽吸10 min。
 

4A.  導流管朝下將96孔DNA制備板于長纖維性紙巾上用力拍擊6次。
 

5A.  將96孔DNA制備板置于96孔V型底板上，在膜正中央加25-30 ul 水或Eluent，室溫靜置1 min。3 000xg離心5 min洗脫DNA。
 

B. 離心法
 

1B.  在PCR、酶切、酶標或測序反應液中，加3個體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 ul，加至100 ul）；混勻后，轉移到96孔DNA制備板中，將96孔DNA制備板置于96孔1.6 ml深孔板中，1 000xg離心1 min，棄濾液。
 

2B.  在96孔DNA制備板中，加0.3 ml Buffer W2，1 000xg離心1 min，棄濾液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌一次。
 

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。
 

3B.  將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，3 000xg離心10 min。
 

4B.  將96孔DNA制備板置于潔凈的96孔V型底板中，在膜正中央加25-30 ul水或Eluent，室溫靜置1 min。3 000xg離心5 min洗脫DNA。

1.  將洗脫液或水加熱至65℃，有利于提高洗脫效率。
 

2.  DNA分子呈酸性，建議在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脫液中保存。