DNA純化
首先利用瓊膠電泳將不同分子量的DNA片段分開,將某一特定分子量區域的瓊膠切下,利用DNA extraction kit將DNA從瓊膠中溶出并濃縮.
實驗材料
( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,
0.25% xylene cyanol
( 紫外光箱
( 下列試劑來自GeneAid公司所售的Gel/PCR Fragment Extraction Kit:
* DF Buffer
* Wash Buffer
* Elution Buffer:10mM Tris-HCl(pH8.5)
* DF Column
* 2ml Collection Tube
實驗步驟
A.將欲分離之DNA混合物以0.7%瓊膠電泳分離.
B.電泳后,將瓊膠置於紫外光箱上觀察,把含有欲純化之DNA片段的瓊膠部位切下.
C.將步驟B的瓊膠以藍色微量吸管盡可能戳碎.
D.加入500ml DF buffer,55oC作用10分鐘,每2-3分鐘搖晃數次,直至瓊膠完全溶解.
E.將步驟D瓊膠溶液全部吸入DF Column,并套上Collection Tube(收集過濾液).
F.8000rpm離心1分鐘,將過濾液倒掉.
G.加入500ml Wash Buffer,8000rpm離心1分鐘,過濾液倒掉.
H.14000rpm離心2分鐘.
I.將DF Column轉移至上另一乾凈的微量離心管.加入15ml Elution Buffer,室溫靜置2分鐘.
J.14000rpm離心2分鐘,微量離心管內之液體即為純化的DNA片段.
K.取0.5ml純化的DNA加入4.5mlDDW及1ml 6x DNA loading dye,跑0.7%瓊膠電泳,與marker比較,估計DNA的濃度.