HPLC測定開光復明丸中黃芩苷的含量

開光復明丸為《中華人民共和國衛生部藥品標準》(中藥成方制劑)第3冊收載品種[1]，是由梔子、黃芩等18味中藥組成的復方制劑，具有清熱散風，退翳明目等作用。用于肝肺熱盛引起爆發火眼，紅腫痛癢，眼瞼赤爛，云翳氣蒙，羞明多眵。黃芩的有效成分為黃芩苷、黃芩苷元、二氫黃酮等黃酮類化合物，現代藥理試驗證明，黃芩苷有抗微生物、抗變態反應和抗炎等顯著作用，因此選取黃芩苷作為質量控制的指標成分。正文采用高效液相色譜法測定樣品所含黃芩苷的含量，該法靈敏度高、專屬性好、操作簡便、重現性好，測定結果準確、可靠，可作為本品質量控制的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀;VWD紫外檢測器;AX205梅特勒-托利多電子分析天平;KQ-300VDB超聲波清洗器。

1.2 試藥 甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸(分析純)(為北京化工廠生產)。黃芩苷對照品(批號110715-200514，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所提供)。開光復明丸三批(批號6013864;6013865;6013866)，中國北京同仁堂(集團)有限責任公司北京中藥二廠。

2 實驗方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取黃芩苷對照品10.06mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芩苷0.04024mg)。

2.1.2 供試品溶液 取重量差異項下的本品，剪碎，取約0.5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入70%乙醇適量，密塞，超聲處理(功率300W，頻率 40kHz)30min，放冷至室溫，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密吸取續濾液2ml，置10ml量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液 按處方比例，取不含黃芩成分的陰性制劑，同供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.2 色譜條件[2] 色譜柱：ZORBAX SB-C18 (250mm×4.6mm，5μm)分析柱;流動相：甲醇-水-磷酸(50：50：0.2);檢測波長：277nm;流速1.0ml/min;柱溫：40℃。分別取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液(批號：6013864)、陰性對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得的分離色譜圖如圖 1顯示。結果表明，黃芩苷與其他成分分離良好，不干擾測定，測得理論塔板數按黃芩苷峰計算不低于2500，黃芩苷峰與相鄰峰的分離度大于1.5，符合要求。

1.黃芩苷

圖1 HPLC色譜圖2.3 線性關系 精密稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含0.2012mg溶液，作為儲備液。分別精密量取對照品儲備溶液0.5、1.0、2.0、3.0、 4.0ml置于10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。分別精密吸取上述對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，按正文所述色譜條件測定峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行回歸處理。得黃芩苷回歸方程：Y=29.59708249X-69.11618323, r=0.9991 ,n=6，表明黃芩苷在0.1005~0.8048μg范圍內有良好的線性關系。

2.4 回收率試驗 稱取已知含量的同一批樣品(批號6013864，含量為3.927mg/g)約0.3g(6份)，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品溶液 (0.04312mg/ml)各25ml，按供試品溶液制備及上述色譜條件操作，依法制備、進樣、記錄色譜圖、計算回收率，結果見表1。表1 開光復明丸中黃芩苷加樣回收測定結果

2.5 穩定性試驗 精密稱取供試品(批號6013864)0.5060g ，照正文所述方法制備供試品溶液，照上述色譜條件，分別在0、1、4、9、20、24h依法測定，記錄峰面積，結果峰面積的RSD%=1.2% (n=6)。表明在24h內基本穩定，本方法有良好的穩定性。

2.6 精密度試驗 取供試品溶液，按上述色譜條件重復進樣6次，峰面積的RSD%=2.59%(n=6)。

2.7 供試品含量測定 精密吸取黃芩苷對照品溶液和供試品溶液各10μl，按上述色譜條件測定，以外標法計算樣品中黃芩苷的含量，共測定3批供試品。結果見表2。表2 供試品含量測定結果

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇 在本試驗中稱取同一批號的樣品，分別加入30%乙醇、50%的乙醇、70%乙醇及甲醇等溶劑，進行超聲處理30min，按照正文含量測定項下方法進行測定，結果表明，采用70%乙醇為溶劑，提取較完全且分離良好，峰形良好。

3.2 提取方法的選擇 在本試驗中稱取同一批號的樣品，采用70%乙醇考察了回流提取、超聲提取、冷浸提取等方法，結果表明，超聲處理30min相當于1g樣品的峰面積最大，因此采用較為簡便的超聲處理提取方法。

3.3 流動相的選擇[2] 參考文獻《中國藥典》2005年一部黃芩項下含量測定方法所用的流動相，分別采用甲醇-水-磷酸(50：50：0.2;47：53：0.2;53：47：0.2)為流動相，進行實驗，結果表明以甲醇-水-磷酸(50：50：0.2)為流動相時，黃芩苷基線分離，且峰形較好，故選擇流動相為甲醇-水-磷酸 (50：50：0.2)。

3.4 最大吸收波長的選擇 黃芩苷對照品甲醇溶液(濃度為0.03048mg/ml)經紫外吸收光譜掃描，在277nm處有最大吸收，故確定檢測波長為277nm。

3.5 方法適用性 本法色譜條件與系統，能較好地將開光復明丸中黃芩苷與其他成分完全分離，說明本法能準確地測定開光復明丸中黃芩苷含量，結果穩定、重現性好。為開光復明丸制劑的質量控制提供了可靠的依據。

【參考文獻】

1 國家藥典委員會.中國衛生部藥品標準中藥成方制劑.北京：衛生部藥典委員會，1998，33.

2 國家藥典委員會.中國藥典，一部.北京：化學工業出版社，2005,211-212.

3 楊娟,黃敬群,李紅. HPLC法測定乳結消片中橙皮苷和黃芩苷的含量. 沈陽藥科大學學報,2008,25(9)：732-735.

4 范強,孫毅坤,史新元,等. 高效液相色譜法測定國公酒中3種成分的含量. 藥物分析雜志,2007,(7)：958-960.