Hanks液的配制方法
甲液:Na2HPO4?2H2O 0.06克 KH2PO4 0.06克 MgSO4?7H2O 0.20克葡萄糖 1.00克 NaCl 8.00克三蒸水 750毫升
乙液:CaCl2 0.14克三蒸水 100毫升
①將乙液徐徐加入甲液中。②將0.35克NaHCO3溶解在37℃ 100毫升三蒸水中。③用數滴NaHCO3液溶解0.02克酚紅。④將②、③液移入①液中。⑤用三蒸水定容至1000毫升,充分混勻,4℃冰箱過夜。⑥濾過消毒,小瓶分裝,冷藏。
注意:酚紅對細胞有一定毒性,目前實驗中的用量除0.02克外,還有0.01克和0.005克,也有BSS液中不加酚紅的。酚紅量不同,BSS顏色也不同。
TBS是Tris-HCl緩沖鹽溶液,為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液
Tris緩沖鹽水(TBS):10mmol/L,Tris含0.9%NaCl,用1N HC1調pH至7.4
TRISbuffer:三羥甲基氨基甲烷緩沖液
TRISdiluent:三羥甲基氨基甲烷稀釋液
Hanks液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hanks液則是無鈣鎂離子的Hanks液。BSS與細胞生長狀態下的pH值、滲透壓及無菌狀態一致,且配方簡單,是組織培養基本用液,常用于配制培養基及其他用液,或洗細胞等,細胞在BSS中可生存幾個小時。 胰蛋白酶(胰酸)溶液是一種常用的細胞消化液,原代培養時用于處理組織塊,使細胞分離下來。傳代時用胰蛋白酶使培養細胞離開所貼附的培養瓶表面,并分散成單個細胞。胰蛋白酶主要采自牛或豬的胰臟,呈白色粉末狀,易潮解,應在低溫干燥處保存。胰酶的活力常用一份胰酶解離酪蛋白的份數表示,常用胰酶活力為1:125或1:250。本實驗室一般用1:250(GRC公司生產)。胰蛋白酶對細胞的分離效果與細胞的類型、特性和瓶壁表面特性有關。一般來說濃度大、溫度高(勿高于37℃)、作用時間長,則對細胞分離能力大。但超過一定程度會損傷細胞,導致細胞傳代后不能貼壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃時消化能力最強。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清會降低胰酶活力,所以配制胰酶時須用無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。當消化結束時,可加入少量血清或含血清的培養基以終止胰酶作用。 細胞傳代使用的胰酶濃度是0.25%或0.2%。用于原代細胞培養消化組織塊則為0.1%或0.125%。
PBS可以為三種溶液的英文縮寫,分別是
1.磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered solution)、
2.磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate buffered saline)及
3.磷酸鹽緩沖鈉(phosphate buffered sodium),
其配制方法不同,pH值不同,發揮的生物學作用亦不完全相同。
如無特殊說明,生物學上常用的PBS是中性磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered solution)。
無鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水(PBS)
(0.15Mol/L PH 7.2)
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g
(如為Na2HPO4·12H2O,則為2.89g)
KH2PO4 0.2g
將上述試劑依次溶于1 000ml去離子水中,完全溶解后,115℃高壓滅菌10min~15min,存在4℃冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細胞分散劑以及洗滌細胞培養物。
Tris
分子式: (HOCH2)3CNH2
分子量.: 121.14
(1) 規格:
外觀:白色結晶
含量:≥99.5 %
熔點:168-172℃
水不溶物:≤0.01%
強熱殘份:≤0.05%
重金屬(as pb):≤5PPM
干燥失重:≤0.2%
吸光度(260nm):≤0.2
PH(0.1mol/L, 25℃):10.0-10.8
Fe:≤1PPM
SO42+:≤5PPM
別名: 三羥甲基氨基甲烷; 2-氨基-2-羥基-1,3-丙二醇; 氨丁三醇; 緩血酸銨; 三甲醇氨基甲烷;
Trishydroxymethylaminomethane;
2-amino-2-hydroxymethylpropanediol; THAM; TRIS; tris base; Tris buffer;
free base; Tris(hydroxymethyl)methylamine; Trizma; trizma base;
Trometamol; Tromethamine; Tromethane
Usage: 用作緩沖劑。Tromethamine is
used as an intermediate for the preparation of surface active agents,
vulcanization accelerators, and pharmaceuticals, and used as a
titrimetric standard.