MALDlMS實驗

實驗方法原理

線性 MALDI-MS：MALDI-MS質譜儀恐怕是概念上和設計上都最簡單的質譜儀，分子（分析物）經 MALDI 方式離子化，離子的質荷比 (m/z）由飛行時間質分析器檢測（見圖 5,1) 。 測量的質量精確度與m/z有關， 25ku 以下可達到約 0.01%-0.05% 的精確度，到 300ku 精確度達到±0.05% --0.3%。MALDI 也能分析溶解在磷酸鹽， Tris等生物緩沖液中的分析樣品，或含有少量脲、非離子變性劑及一些堿金屬鹽的樣品溶液。

實驗材料 蛋白樣品

試劑、試劑盒 基質

儀器、耗材 MALDI-MS

實驗步驟

蛋白質和多肽的 MALDI 分析包括以下一系列步驟

(1) 被分析物與基質（小分子芳香化合物）混合。基質通常溶解在酸性有機溶劑中，以超過樣品 1000 倍的量與樣品混合，將樣品和基質加到金屬片／靶上，溶劑在空氣中揮發后，形成了樣品-基質共結晶．，

(2) 將加有樣品-基質混合結晶的靶送入質譜儀的真空室 (10-5-10-8Torr) 。

(3) 在金屬片／靶上加+ 20-30kV 的高電壓（產生正離子），同時有短的激光脈沖照射在干燥的樣品上。

(4) 基質晶體吸收特定波長的激光能量（紫外激光 337nm, 紅外激光 2.94μm, 又以熱的形式將能量釋放 引發了解吸附這一迅速的放熱過程又使基質品體升華，基質和樣品分子氣化進入質譜儀的氣相。

(5) 通過在氣相中發生質子化／去質子化，附著陽離子／脫離陽離子，或氧化／還原等過程實現離子化。產生的離子從靶表面（保持 +20-30kV 高電壓）被推斥并加速進入一系列的離子透鏡（保持接地電壓），離子透鏡聚焦離子進入飛行時間質量分析器的無場漂移區 (50-300cm) 貯檢測器安裝在無場漂移區末端，通過飛行管道的離子被檢測器記錄。

(6) MALDI 離子化過程送入質量分析器的離子實質上具有相間的終動能。在動能定時離子的速度與離子的質荷比m/z成反比。因此，線性檢測器中，離子到達飛行管道另一端檢測器的時間反映被檢測離子的m/z。

(7) 離子通過無場漂移區的飛行時間由激光脈沖面向發檢測器記錄。因此，每一離子化過程 產生的每批離子到達檢測器的飛行時間都被記錄下，并被換為質荷比m/z。

注意事項

離子越小，飛行速度越快，因此質荷比m/z可用已知質量和電荷狀態的化合物的飛行時間作校正并用經驗公式計算出來（通常用一個基質離子和一個蛋白質或多肽離子作校正，被分析物的質量包括在此質量范圍內）。離子動能 (E)與其質量 (m) 和速度 (v) 的關系可被表述為 E=1/2mv2。因此，對于一個單電荷離子，其飛行時間（由速度決定）與分子質量的平方根成反比。