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  • 發布時間:2020-09-07 10:58 原文鏈接: PCR產物的檢測PCRELISA法

    在一個引物的5’端標記上生物素以便使其能與包被板上的親合素結合而固定PCR產物,而在另一引物的5’端標記FITC,用HRP標記的抗FITC抗體與之結合顯色,即可進行常規ELISA檢測。如設立標準對照,此技術還可用于定量分析。

    【試劑與配置】
    包被液:4.3mmol/L Na2HPO4, 1.4mmol/L K2HPO4, 0.05% (w/v) Tween20, 40mmol/L NaCl, 2.7mmol/LKCl (pH7.2)
    鏈霉親和素(13U/mg, Sigma):用包被液配置為1μg/ml;
    HRP標記的抗FITC抗體:用包被液稀釋至工作濃度
    顯色液:1mg/ml的TMB(溶于DMSO),用50mmol/L乙酸鈉-檸檬酸(pH4.9)稀釋10倍;
    終止液:2mol/L H2SO4
    30%過氧化氫

    【操作方法】
    (1)在酶標板的每孔中加100μl鏈霉親和素,室溫包被過夜;
    (2)室溫下,用包被液洗2次;
    (3)1μl PCR產物用50μl包被液稀釋,加入孔中,室溫放置30min;
    (4)包被液洗3~6次,每孔再加入50μl HRP-抗FITC抗體,室溫作用30min;
    (5)包被液洗3~6次,加入30%過氧化氫3μl,顯色液80μl,室溫放置2~5min,觀察顏色變化;
    (6)加入終止液終止反應,酶標儀上測OD450nm值。


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