PCR條帶微弱原因及解決方法

CDNA：0.5微升primer：1微升dNTP：2微升10*buffer：2微升TAG酶：0.25微升D.W.：14.25微升PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+)
1、預變性（Initial
denaturation）．
模板DNA完全變性對PCR能否成功至關重要，一般95℃加熱3-5分鐘。
2、引物退火（Primer
annealing）
退火溫度一般需要憑實驗（經驗）決定。
退火溫度對PCR的特異性有較大影響。
3、引物延伸
引物延伸一般在72℃進行（Taq酶最適溫度）。
延伸時間隨擴增片段長短而定。
4、循環中的變性步驟
循環中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列完全變性：
變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹底，易造成擴增失敗。
5、循環數
大多數PCR含25-35循環，過多易產生非特異擴增。
6、最后延伸
在最后一個循環后，反應在72℃維持5-15分鐘．使引物延伸完全，并使單鏈產物退火成雙鏈。
以上任何一個環節都會影響條帶的亮暗程度，還有你可以試試多加點Buffer。